ECV-304人脐静脉内皮细胞的应用

背景^[1-3]

ECV-304人脐静脉内皮细胞是一种来源于脐带组织的干细胞，它是脐静脉的重要组成细胞之一，理论上能够进行无限的传代。

人脐静脉内皮细胞（英Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）在进行血管内皮细胞实验时，通常选用的细胞模型为人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells，简称HUVECs)。而不是直接采用静脉血管内皮细胞或动脉血管内皮细胞。原因是脐静脉内皮细胞具有干细胞的潜能，理论上可以传代50-60次。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

应用^[4][5]

用于阿托伐他汀对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞（ECV304）LOX-1表达的影响研究

探索阿托伐他汀对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(ECV304)LOX-1表达的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,分对照组、低密度脂蛋白(25mg/L)组、氧化型低密度脂蛋白(25、50和100mg/L)组处理24h后,以RT-PCR和Western-blotting检测LOX-1表达情况；用阿托伐他汀(1和10umol/L)处理ECV304细胞后,再分别与氧化型低密度脂蛋白(O和50mg/L)共孵育24h后,检测LOX-1表达情况。

同时在相差显微镜下观察细胞形态变化。结果：氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞(ECV304)LOX-1的表达,并呈相应的细胞形态学改变,而且高浓度组较低浓度组的诱导作用更强；阿托伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的LOX-1表达,且高浓度组较低浓度组的抑制作用更强。

结论：氧化型低密度脂蛋白可诱导人脐静脉内皮细胞(ECV304)表达LOX-1,阿托伐他汀可呈剂量依赖性抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞(ECV304)LOX-1表达,发挥其在治疗动脉粥样硬化中非降脂的功能。

参考文献

[1]The effect of intensified lipid-lowering therapy on long-term prognosis in patients with peripheral arterial disease[J].Harm H.H.Feringa,Stefanos E.Karagiannis,Virginie H.van Waning,Eric Boersma,Olaf Schouten,Jeroen J.Bax,Don Poldermans.Journal of Vascular Surgery.2007(5)

[2]Adhesion Molecule Expression in Fibroblasts:Alteration in Fibroblast Biology After Transfection With LOX-1 Plasmids[J].Kui Chen,Jiawei Chen,Yong Liu,Jin Xie,Dayuan Li,Tatsuya Sawamura,Paul L.Hermonat,Jawahar L.Mehta.Hypertension.2005(3)

[3]Serum Soluble Lectin-Like Oxidized Low-Density Lipoprotein Receptor-1 Levels Are Elevated in Acute Coronary Syndrome:A Novel Marker for Early Diagnosis[J].Kazutaka Hayashida,Noriaki Kume,Takatoshi Murase,Manabu Minami,Daisuke Nakagawa,Tsukasa Inada,Masaru Tanaka,Akira Ueda,Goro Kominami,Hirofumi Kambara,Takeshi Kimura,Toru Kita.Circulation.2005(6)

[4]In Vivo and In Vitro Studies Support That a New Splicing Isoform of OLR1 Gene Is Protective Against Acute Myocardial Infarction[J].Ruggiero Mango,Silvia Biocca,Francesca del Vecchio,Fabrizio Clementi,Federica Sangiuolo,Francesca Amati,Antonio Filareto,Sandro Grelli,Paola Spitalieri,Ilaria Filesi,Cartesio Favalli,Renato Lauro,Jawahar L.Mehta,Francesco Romeo,Giuseppe Novelli.Circulation Research.2005(2)

[5]占凡.阿托伐他汀对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞（ECV304）LOX-1表达的影响[D].南华大学,2009.