PBMC 人外周血单核细胞的应用

背景^[1-3]

PBMC（peripheral blood mononuclear cell），外周血单个核细胞，顾名思义，其主要细胞类型为血液里边具有单个核的细胞，主要包括淋巴细胞（Ｔ＼Ｂ），单核细胞，吞噬细胞，树突状细胞和其他少量细胞类型。其中淋巴细胞占很大一部分。分离ＰＢＭＣ的主要目的是为了将多核细胞和红细胞去除，从而能够很方便地模拟体外的血液免疫环境。

周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同，红细胞和多核白细胞的比重在1.092左右，单个核细胞的比重为1.075-1.090，血小板为1.030-1.035。因此利用一种介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。

外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是mononuclear cell单个核细胞，而不是Monocyte单核细胞。外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque（聚蔗糖－泛影葡胺）密度梯度离心法。

Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400,000，当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。

应用^[4][5]

用于急性心肌梗死患者外周血单核细胞自噬相关蛋白的表达及意义研究

检测急性心肌梗死患者外周血单核细胞自噬相关蛋白LC3-I、LC3-II、Beclin 1的表达水平,并探讨其临床意义。

方法入选急性心肌梗死患者62例,作为研究组;稳定型心绞痛患者56例,作为对照组。提取患者外周血单核细胞,采用细胞免疫荧光检测两组MAP1-LC3的表达水平,通过Western blotting印迹法检测两组LC3-I、LC3-II和Beclin 1的表达水平;

另外,比较在急性心肌梗死不同发病时间、不同Gensini积分、以及PCI术前与术后的自噬水平和自噬通量受阻情况,分析外周血单核细胞自噬在急性心肌梗死过程中的意义。

结果1、与对照组相比,急性心肌梗死时外周血单核细胞中MAP1-LC3绿色荧光斑点数目明显增多,LC3-I、LC3-II和Beclin 1的水平均显著升高(P<0.05);

2、急性心肌梗死的发病时间越长LC3-I、LC3-II和Beclin 1的水平越高,而且在发病时间>24h后自噬通量受阻最为明显(P<0.05);

3、与低Gensini积分(<40分)组相比,急性心肌梗死高Gensini积分(≥40分)组的LC3-I、LC3-II和Beclin 1水平显著升高,且自噬通量受阻明显(P<0.05);

4、与PCI术前相比,急性心肌梗死PCI术后的LC3-I、LC3-II和Beclin 1水平显著降低,且自噬通量受阻改善(P<0.05)。

结论急性心肌梗死发生时外周血单核细胞自噬水平显著升高;随着发病时间延长和冠脉病变严重时自噬水平进一步升高,且自噬通量发生阻滞;在PCI处理后,自噬水平下降,自噬通量受阻得到改善。

单核细胞自噬可能参与急性心肌梗死的发病过程,通过适当的调控外周血单核细胞自噬和改善自噬通量,可能成为改善心肌梗死后心肌细胞损伤,减少急性冠脉事件和降低死亡风险的治疗靶点。

参考文献

[1]Bifunctional Supramolecular Hydrogel Alleviates Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury by Inhibiting Autophagy and Apoptosis[J].Deng,Yi,Chen,Guoqin,Ye,Min,He,Yingyan,Li,Zehua,Wang,Xianbao,Ou,Caiwen,Yang,Zhimou,Chen,Minsheng.Journal of Biomedical Nanotechnology.2018(8)

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[3]Vaspin alleviates myocardial ischaemia/reperfusion injury via activating autophagic flux and restoring lysosomal function[J].Feihong Yang,Li Xue,Ziqi Han,Feng Xu,Shengchuan Cao,Shuai Dai,Baoshan Liu,Qiuhuan Yuan,Zheng Wang,Ping Guo,Yuguo Chen.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2018

[4]Alpha7 nicotinic acetylcholine receptor activation protects against myocardial reperfusion injury through modulation of autophagy[J].Zuoxu Hou,Yaguang Zhou,Hongyan Yang,Yan Liu,Xuechao Mao,Xinghua Qin,Xiaoliang Li,Xing Zhang,Yuanyuan Hu.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2018(2)

[5]]陈林.急性心肌梗死患者外周血单核细胞自噬相关蛋白的表达及意义[D].成都医学院,2019.