MRS琼脂培养基的应用

背景^[1-3]

MRS琼脂培养基是弱选择性固体培养基，支持乳酸菌生长鉴定。

MRS培养基工作原理

蛋白胨提供氮源。牛肉浸粉和酵母提取物作为维生素来源。葡萄糖是可发酵的碳水化合物。培养基的微酸性环境，有利于乳酸杆菌的生长。乙酸钠和柠檬酸铵是选择剂，同时也是能量物质。乙酸钠对革兰氏阴性细菌和霉菌有抑制作用，但对乳酸杆菌无影响。硫酸镁和硫酸锰提供代谢必需的离子。司班80或吐温80是非离子型表面活性剂，辅助乳杆菌对营养物质的利用。琼脂是培养基的凝固剂。

使用说明

称取本品44.3g于1L蒸馏水或去离子水中，加热煮沸至完全溶解，按试验需求加入其它营养成分，分装，121℃高压灭菌15分钟,灭菌结束后请务必摇匀，以防琼脂沉积于器皿底部而结块。

乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的统称。这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性，至少包含18个属，共200多种。除极少数外，其绝大部分都是人体内必不可少的、且具有重要生理功能的菌群，广泛存在于人体的肠道中。

乳酸菌不仅是研究分类、生化、遗传、分子生物学和基因工程的理想材料（在理论上具有重要的学术价值），而且在工业、农牧业、食品和医药等与人类生活密切相关的重要领域具有极高的应用价值。

应用^[4][5]

用于猪源性嗜酸乳杆菌的分离驯化及其微胶囊化的研究

嗜酸乳杆菌作为动物肠道中重要的益生菌,具有维护动物肠道健康、缓解不良应激、改善饲养环境、调节机体脂肪代谢和改善畜禽产品品质等功能。乳酸菌微生态制剂作为动物饲料添加剂正逐渐被广大消费者应用。

从仔猪粪便中分离获得一株嗜酸乳杆菌经驯化,提高其对胃肠道的耐受性,并研制出微胶囊制剂,其研究结果如下：

(1) 利用MRS琼脂平板梯度稀释法自15d龄、未使用过任何抗生素药物的仔猪粪便中筛选得到13株乳酸杆菌疑似菌株,通过生理生化鉴定,初步确定其中9为乳酸杆菌。经碳水化合物发酵试验,推测编号La-5,La-6,La-8和La-9的4株菌为嗜酸乳杆菌。比较4株菌的形态,长势及产酸能力,选定菌株La-5作为本研究的出发菌株。通过对菌株La-5的16 SrDNA同源性分析,结合其生理生化试验结果确定菌株La-5为嗜酸乳杆菌(Lactobaclllus acidophilus)。

(2) 以嗜酸乳杆菌La-5为出发菌株,采用梯度传代驯化法,对其耐酸、耐胆盐、耐热性能进行驯化,得到一株对低pH、高胆盐、高温具有良好强耐受性的优良菌株La-5c。对菌株La-5c的产酸性能研究表明,经发酵48h后的MRS培养液的总酸含量为12.88g/L,较空白培养液提高了大约4.8倍。说明嗜酸乳杆菌La-5c具有良好的产酸性能,适合制成菌剂应用于动物饲料添加剂。

(3)用嗜酸乳杆菌La-5c喂养小白鼠,进行安全性及益生效果评价,结果表明菌株La-5c安全、无毒副作用,可明显增加小白鼠的体重,降低饲料的使用量,促进小白鼠对营养物质的吸收转化,明显改善小白鼠的免疫器官的生长发育。说明嗜酸乳杆菌La-5c具有很好的益生效果。

参考文献

[1]Growth performance,digestibility,gut environment and health status in weaned piglets fed a diet supplemented with a complex of lactic acid bacteria alone or in combination with Bacillus subtilis and Saccharomyces boulardii[J].Hoang Huong Giang,Tran Quoc Viet,Brian Ogle,Jan Erik Lindberg.Livestock Science.2011(2)

[2]Evaluation of multi-microbe probiotics prepared by submerged liquid or solid substrate fermentation and antibiotics in weaning pigs[J].J.Y.Choi,P.L.Shinde,S.L.Ingale,J.S.Kim,Y.W.Kim,K.H.Kim,I.K.Kwon,B.J.Chae.Livestock Science.2010(1)

[3]Dietary modulation of gut microflora in broiler chickens:a review of the role of six kinds of alternatives to in-feed antibiotics[J].YANG,Y,IJI,P A,CHOCT,M.English.2009(1)

[4]Industrial Food Animal Production,Antimicrobial Resistance,and Human Health[J].Ellen K.Silbergeld,Jay Graham,Lance B.Price.Annual Review of Public Health.2008[5]胡国才.猪源性嗜酸乳杆菌的分离驯化及其微胶囊化的研究[D].江西农业大学,2013.