MIU培养基的应用

背景^[1-3]

MIU培养基用于细菌的复合生化试验（动力靛基质尿素酶试验）。

【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示剂为酚红。具有色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具有脲酶的细菌能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。

色氨酸酶可以催化色氨酸厌氧分解产生吲哚和丙酮酸和氨的反应的酶，EC.1.13.11.11。在微生物中特别是大肠杆菌有大量存在，以磷酸吡哆醛为辅酶，对半胱氨酸和丝氨酸也有一定作用。在动物体内无此酶。

尿素酶是一种含镍的寡聚酶。催化尿素水解生成碳酸和两分子氨的含镍酶，并释放出氨和二氧化碳。其代表种为巴氏芽孢杆菌（Bacillus pasteurli）和尿素小球菌（Microc-oceus ureae）。经常在含有尿素（20%）并用碳酸铵碱化的培养基中旺盛繁殖。对自然界的尿素转化起重要作用。

普通尿素(N≥46.4%)是酰铵态氮肥，所含氮素需经尿素细菌分泌的脲酶分解转化为铵态氮后，才能被植物吸收，利用率一般为30%-40%

尿素细菌生存于土壤、厩肥及污水中，是好氧性或兼厌氧性的细菌，在强碱性培养基中生长良好，最低的PH值是7，利用铵盐或尿素作为氮源，利用各种有机物（单糖、双糖、淀粉、有机酸等）为碳源和能源。代谢类型为异养需氧型或兼厌氧型

【方法】：将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于MIU培养基，35ºC，18-24h，观察动力和脲酶反应后，再滴加吲哚试剂。

【结果】：扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰红色为阳性；培养基变红脲酶阳性。

应用^[4][5]

用于一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究

采用肠道菌选择培养基、鉴别培养基分离泌尿系统反复感染患者的尿液样本中的变形杆菌，经进一步鉴定和传代减毒后感染小鼠，分析脾细胞体外增殖能力和脾细胞分泌IL-2、IFN-γ水平及抗体变化；并通过流式细胞仪、酶联免疫斑点试验分析乙肝病人外周血树突细胞信号分子表达和IFN-γ水平变化。

方法1．留取泌尿系统反复感染患者的尿液样本，将所取样品用分区划线法分别接种于肠道菌选择培养基（S，S琼脂）及鉴别培养基（伊红美蓝琼脂）平皿中，置37℃温箱培养18～24小时后，观察菌落特征，在培养后的平皿中找到符合变形杆菌菌落特点的菌落。将挑出的菌落做进一步的鉴定。

2．用Blendon镀银染色后观察、三糖铁琼脂培养基试验、动力靛基质尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验对挑出的菌落作初步鉴定。

3．从泌尿系统反复感染患者的尿液样本中分离的变形杆菌通过特殊的处理，将原有的毒性减低，并做毒性试验以证明其毒性的降低。再用三糖铁琼脂培养基试验、动力靛基质尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、迁徙生长试验、硫化氢产生试验、液化明胶试验、西蒙枸橼酸盐试验、吲哚试验、氨基酸脱羧酶试验、糖（醇、苷）类发酵试验（麦芽糖、木糖）、对氯霉素的敏感性试验对特殊处理后的菌种进行最后鉴定。

参考文献

[1]Detection of Cellular Immunity to Rabies Antigens in Human Vaccinees[J].Susan M.Moore,Melinda J.Wilkerson,Rolan D.Davis,Carol R.Wyatt,Deborah J.Briggs.Journal of Clinical Immunology.2006(6)

[2]The flavonoid ellagic acid from a medicinal herb inhibits host immune tolerance induced by the hepatitis B virus-e antigen[J].Eun Hwa Kang,Tae Young Kown,Goo Taeg Oh,Weung Feel Park,Sung-Il Park,Sung Kyu Park,Young Ik Lee.Antiviral Research.2006(2)

[3]Different composition of intrahepatic lymphocytes in the immune‐tolerance and immune‐clearance phase of chronic hepatitis B[J].D.Sprengers,R.G.van der Molen,J.G.Kusters,B.Hansen,H.G.M.Niesters,S.W.Schalm,H.L.A.Janssen.J.Med.Virol..2006(5)

[4]Hepatitis B virus‐induced defect of monocyte‐derived dendritic cells leads to impaired T helper type 1 response in vitro:mechanisms for viral immune escape[J].SusanneBeckebaum,Vito R.Cicinnati,XiaZhang,StanislavFerencik,AndreaFrilling,HansGrosse‐Wilde,Christoph ErichBroelsch,GuidoGerken.Immunology.2003(4)

[5]王鹏.一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究[D].军医大学,2007.