DNA损伤诱导转录样蛋白4抗体

背景^[1-3]

DNA损伤诱导转录样蛋白4抗体是一类可以特异性结合DNA损伤诱导转录样蛋白4的多克隆抗体，主要用于检测DNA损伤诱导转录样蛋白4的相关实验。DNA损伤是复制过程中发生的DNA核苷酸序列永久性改变，并导致遗传特征改变的现象。情况分为：substitutation（替换）deletion（删除）insertion（插入）exon skipping（外显子跳跃）。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中DNA损伤诱导转录样蛋白4水平。用纯化的DNA损伤诱导转录样蛋白4抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入DNA损伤诱导转录样蛋白4，再与HRP标记的DNA损伤诱导转录样蛋白4抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的DNA损伤诱导转录样蛋白4呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中DNA损伤诱导转录样蛋白4浓度。

DNA存储着生物体赖以生存和繁衍的遗传信息，因此维护DNA分子的完整性对细胞至关紧要。外界环境和生物体内部的因素都经常会导致DNA分子的损伤或改变，而且与RNA及蛋白质可以在细胞内大量合成不同，一般在一个原核细胞中只有一份DNA，在真核二倍体细胞中相同的DNA也只有一对，如果DNA的损伤或遗传信息的改变不能更正，对体细胞就可能影响其功能或生存，对生殖细胞则可能影响到后代。

所以在进化过程中生物细胞所获得的修复DNA损伤的能力就显得十分重要，也是生物能保持遗传稳定性之所在。在细胞中能进行修复的生物大分子也就只有DNA，反映了DNA对生命的重要性。另一方面，在生物进化中突变又是与遗传相对立统一而普遍存在的现象，DNA分子的变化并不是全部都能被修复成原样的，正因为如此生物才会有变异、有进化。

应用^[4][5]

用于全氟癸酸（PFDA）引起细胞DNA损伤对胃癌的影响及作用机制研究

全氟癸酸(Perfluorodecaoic Acid,PFDA)是一种全氟化合物(PFCs),据报道它对大鼠可产生毒性作用。它可引起食欲不振和严重体重减轻、心动过缓、体温过低和血清甲状腺激素水平下降,PFDA的细胞和生理效应包括生殖和肝毒性以及脂质代谢紊乱。基因毒性是指遗传物质,染色体或DNA,被物理或化学物质破坏。基因毒性可导致严重的生物功能障碍甚至疾病,其作用通常需要很长时间才能发生。化合物干扰DNA完整性和基因表达的能力使它们具有潜在的致突变甚至致癌的能力。有报道称PFCs可诱导DNA代谢稳态紊乱。

首次发现PFCs通过抑制NHEJ主要修复因子X射线修复交叉互补蛋白4 X-ray repair crosscomplementing 4,XRCC4)诱导细胞内DSBs增加,并通过T细胞因子4(T-cell specific factor 4,TCF4)调控XRCC4表达。

PFDA在胃癌细胞DNA损伤中的作用目的:体内和体外同时验证PFDA导致胃癌细胞DNA损伤,利用western-blot方法检测DNA损伤指标组蛋白H2AX磷酸化(Histone H2AX phosphorylation,γ-H2AX)表达的变化并利用DNA末端连接检测方法检测DNA损伤程度。方法:1.采用胃癌细胞系AGS和SGC进行实验。将两种细胞分别用含F12的DMEM+1 0%的胎牛血清和1640DMEM+1 0%的胎牛血清分别培养。

参考文献

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[2]Increased level of DNA damage in some organs of obese Zucker rats byγ‐H2AX analysis[J].Alessia Azzarà,Anna Chiaramonte,Erika Filomeni,Barbara Pinto,Stefano Mazzoni,Simona Piaggi,Maria Angela Guzzardi,Fabrizio Bruschi,Patricia Iozzo,Roberto Scarpato.Environmental and Molecular Mutagenesis.2017(7)

[3]Inhibition of PARP1 activity enhances chemotherapeutic efficiency in cisplatin-resistant gastric cancer cells[J].Qiang Wang,Jianping Xiong,Danping Qiu,Xue Zhao,Donglin Yan,Wenxia Xu,Zhangding Wang,Qi Chen,Sapna Panday,Aiping Li,Shouyu Wang,Jianwei Zhou.International Journal of Biochemistry and Cell Bi.2017

[4]Effect of p53βon human gastric cancer cells treated with recombinantmutated human TNF and cisplatin[J].Wansheng Ji,Mingliang Yuan,Li Zhang,Hongmei Zhang,Jianxin Jiao,Zhixing Gao.Molecular Medicine Reports.2017(6)

[5]刘风燕.全氟癸酸（PFDA）引起细胞DNA损伤对胃癌的影响及作用机制[D].山东大学,2019.