小鼠脾细胞MS的应用

背景^[1-3]

小鼠脾细胞MS是从正常成年CD-1小鼠脾脏中分离出来的。MS清除脾脏巨噬细胞，分离后直接冷冻保存，MS对支原体、细菌、酵母和真菌呈阴性。

脾是重要的淋巴器官，位于腹腔的左上方，呈扁椭圆形，暗红色、质软而脆，当局部受暴力打击易破裂出血。

脾位于左季肋区胃底与膈之间，恰与第9-11肋相对，其长轴与第10肋一致。正常情况下，左肋弓下缘不能触及。

脾分为内、外两面，上、下两缘，前、后两端。内面凹陷与胃底、左肾、左肾上腺、胰尾和结肠左曲为邻，称为脏面。脏面近中央处有一条沟，是神经、血管出入之处，称脾门。

脾脏的实质分为白髓、红髓和边缘区三部分。白髓由密集的淋巴细胞构成，是机体发生特异性免疫的主要场所。当抗原侵入脾引起体液免疫应答时，白髓内淋巴小结会大量增多。

红髓主要由脾血窦和脾索组成，红髓内血流缓慢，使抗原与吞噬细胞的充分接触成为可能，是免疫细胞发生吞噬作用的主要场所。

边缘区（MZ）位于红髓和白髓的交界处，此区淋巴细胞较白髓稀疏，以B细胞为主，但有较多的巨噬细胞（Mφ），是脾内捕获抗原、识别抗原和诱发免疫应答的重要部位。

脾储存和净化红细胞，代谢血红蛋白，回收铁。脾脏也为免疫系统提供了一个关键的功能，它对血液中的抗原产生一种初级免疫反应，并合成抗体。脾细胞是来源于脾脏的单核细胞，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞和NK T细胞。原代小鼠脾细胞（MS）可用于分离CD4+T细胞、CD8+T细胞和CD45R+B细胞。

应用^[4][5]

用于FGF-1改构体对小鼠脾细胞增殖、凋亡、IL-2产生的影响研究

FGF-1的生物学效应非常广泛,在组织和器官发育、血管发生、血细胞生成、肿瘤发生、伤口愈合中等发挥重要的作用。FGF-1对免疫系统也有重要的影响,能提高多种刺激诱导的T细胞增殖、凋亡及细胞因子的产生。

方法:1、采用~3H-TdR掺入的方法检测分析MrhFGF-1和野生型hFGF-1对脾细胞增殖的影响。实验组分为(1)对照组;(2)FGF-1(hFGF-1、rhFGF-1、MrhFGF-1)处理组,(3)ConA处理组;(4)ConA+FGF-1(hFGF-1、rhFGF-1、MrhFGF-1)处理组。

2、用流式细胞仪定量分析MrhFGF-1对脾细胞的凋亡保护作用。实验组分为(1)对照组;(2)DEX处理组;(3)DEX+FGF-1(hFGF-1、rhFGF-1、MrhFGF-1)处理组。

3、用HT-2细胞系通过细胞增殖方法间接检测小鼠脾细胞在受到不同刺激因子刺激后产生IL-2的水平。实验分组和细胞增殖实验分组相同。

结果:结果表明,利用DNA重组技术构建的一种非促分裂人FGF-1突变体(MrhFGF-1)和野生型hFGF-1和rhFGF-1相比,对脾细胞的促细胞增殖能力明显降低,但其对细胞凋亡的保护作用和对IL-2产生的影响并无显著性变化,即FGF-1的细胞凋亡保护作用及对IL-2产生的影响并不随着促细胞增殖能力的降低而降低。

参考文献

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[3]Of Worms and Men:An Evolutionary Perspective on the Fibroblast Growth Factor(FGF)and FGF Receptor Families[J].Fran?ois Coulier,Pierre Pontarotti,Régine Roubin,Helge Hartung,Mitchell Goldfarb,Daniel Birnbaum.Journal of Molecular Evolution.1997(1)

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[5]刘华伟.FGF-1改构体对小鼠脾细胞增殖、凋亡、IL-2产生的影响[D].暨南大学,2005.