原代细胞永生化的介绍及方法

介绍^[1]

细胞永生化是当前细胞生物学研究热点之一,所谓永生化是细胞生物学术语,指动物细胞因脱分化失败,受到病毒感染、外源恶意代码转染、辐射或药剂作用后,细胞分裂次数限制机制和DNA检查自毁机制失灵,导致具有无限分裂生长能力的过程。而细胞永生化则是指细胞获得持续生长增殖能力的特性,永生化的细胞具有无限增殖生长性，可长期传代，并多伴有核型改变,细胞永生化是癌变的必经途径。由于正常组织来源的原代细胞在通常的体外培养条件下虽可生长和分裂,但经过有限次的细胞传代后，就会停止增殖,发生衰老和死亡，限制了细胞培养技术的进一步应用,因此有学者通过基因转染等技术将外源性永生化基因导人目的细胞内，如病毒、原癌基因和抑癌基因突变体等,以增加永生化的发生率,进而建立永生化细胞株(immortalized cellstrains)以达到使体外培养的细胞具有无限增殖能力,实现细胞间无差异的目的。

由于商品化的传代细胞系功能和形态均已发生变化,与体内相应部位的细胞相比不能真实模拟体内细胞分化的细胞类型,而原代细胞发育和分化能够更好地模拟病毒感染动物的体内微环境,永生化细胞的表型及功能特性与原代细胞相较甚远，因此原代细胞成为构建平台细胞的首选。

方法^[1]

1、端粒酶转染法：端粒酶活化是各种细胞永生化方法的共同步骤,通过表达端粒酶逆转录酶( human telomerase re-verse transcriptase, hTERT)可以激活端粒酶活性,维持端粒长度,阻止染色体端粒降解,诱导上皮细胞永生化。端粒酶转染建立的永生化细胞可保持正常细胞的生理特性。

2、回复性永生：将已经得到成熟、广泛应用的条件基因敲除技术( conditional gene knockout )-Cre/LoxP系统,联合转基因技术诱导细胞永生化，又称可回复性永生化技术( reversible immortaliza-tion)。

主要参考文献

[1]吴萌，殷建忠，朱武洋；原代细胞永生化的研究进展。《国际病毒学杂志》