人重组激活基因1(RAG-1)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人重组激活基因1(RAG-1)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人重组激活基因1(RAG-1)水平。用纯化的人重组激活基因1(RAG-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入重组激活基因1(RAG-1)，再与HRP标记的重组激活基因1(RAG-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的重组激活基因1(RAG-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人重组激活基因1(RAG-1)浓度。

应用双抗体夹心法测定标本中人重组激活基因1(RAG-1)水平。用纯化的人重组激活基因1(RAG-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入重组激活基因1(RAG-1)，再与HRP标记的重组激活基因1(RAG-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的重组激活基因1(RAG-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人重组激活基因1(RAG-1)浓度。重组激活基因(recombination activating genes,RAGs)是一组具有稳定的能够激活重组反应能力的功能基因,基因的重排是淋巴细胞表面标志发生过程中的一个重要过程,对于细胞成熟后的功能和结构有着重要的作用。因此,RAGs的表达在淋巴细胞分化发育中起十分重要的作用。

应用^[4][5]

人重组激活基因1(RAG-1)ELISA KIT用于重组激活基因1在杏仁核中的表达及其功能研究。

杏仁核是边缘系统的重要结构之一,与学习记忆、情绪、情感密切相关,而且参与精神分裂症、抑郁、癫痫和创伤后应激障碍等多种神经系统疾病的病理过程。杏仁核是条件性恐惧记忆形成和储存的部位,条件性恐惧记忆是由条件刺激和非条件刺激配对训练而形成的。重组激活基因-1(recombination activating gene-1,RAG1)最早在免疫系统中发现,并且与免疫细胞特异性的记忆活动密切相关。它编码的产物与其他相关蛋白协同作用,能够引起V(D)J重排,使得免疫球蛋白和T细胞受体产生高度多样性。既往国外报道了RAG1基因敲除后可以导致动物的免疫记忆功能缺失,引起重度联合免疫缺陷疾病。后来的研究发现,中枢神经系统中有RAG1的转录,并且表达的部位主要集中于海马、边缘系统等与学习记忆有关的脑区,然而RAG1是否与学习和记忆功能有关目前尚未明确。大脑和免疫系统都具有编码记忆的能力,研究资料也表明脑内存在着与免疫系统中相类似的基因重组。为了明确脑内RAG1基因的缺失是否会影响学习记忆功能,通过对RAG1敲除小鼠进行研究发现,RAG1缺失会引起小鼠神经行为的改变。然而,用基因敲除技术来研究RAG1在中枢神经系统中的功能存在着不足之处,因为动物从胚胎期就开始缺失RAG1基因会造成免疫缺陷,对其发育过程会产生干扰,从而对后续实验的结果造成影响。因此本工作采用RNA干扰技术,避开基因敲除技术的弊端,对杏仁核区RAG1的表达进行了基因沉默,比较研究RAG1基因沉默前后大鼠学习和记忆能力的变化。

参考文献

[1]V(D)J Recombination:Mechanisms of Initiation[J].David G.Schatz,Patrick C.Swanson.Annual Review of Genetics.2011

[2]Impaired social recognition memory in recombination activating gene 1-deficient mice[J].Patrick O.McGowan,Thomas A.Hope,Warren H.Meck,Garnett Kelsoe,Christina L.Williams.Brain Research.2011

[3]Sidman Instrumental Avoidance Initially Depends on Lateral and Basal Amygdala and Is Constrained by Central Amygdala-Mediated Pavlovian Processes[J].Biological Psychiatry.2010(12)

[4]Terminal deoxynucleotidyl transferase and repertoire development[J].Cindy L.Benedict,SusanGilfillan,To‐HaThai,John F.Kearney.Immunological Reviews.2009(1)

[5]尹一飞.重组激活基因1在杏仁核中的表达及其功能研究[D].浙江大学,2013.