人3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1(HMGCS1)ELISA KIT

背景^[1-3]

人3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1(HMGCS1)ELISA KIT采用定量夹心酶免疫测定技术。免疫酶技术(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫测定，是通过酶标记抗体或抗原来检测抗原或抗体的方法，其应用范围极广。显示方法是用酶的特殊底物来处理反应后的标本，通过酶催化底物的显色反应来测定抗原或抗体的存在，以酶标作定量或定性分析。标记酶有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶等，它们与抗原或抗体结合后活性不受影响。底物一般是邻苯二胺和对硝基苯磷酸酯。它具有敏感性高、特异性强，既可定性又可定量的特点。免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物，与抗体或抗原联结，与相应的抗原或抗体作用后，通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量，亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究，即酶免疫组织化学技术。

目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验（ELISA），它是使抗原或抗体吸附于固相载体，使随后进行的抗原抗体反应均在载体表面进行，从而简化了分离步骤，提高了灵敏度，即可检测抗原，也可检测抗体。实验方法包括间接法、夹心法及竞争法。HMGCS1特异的抗体已预先包被在微孔板上。将标准品和样品吸取到孔中，并且存在的任何HMGCS1都与固定的抗体结合。除去任何未结合的物质后，将对HMGCS1特异的生物素偶联抗体添加到孔中。洗涤后，将抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶（HRP）加入孔中。洗涤以除去任何未结合的抗生物素蛋白-酶试剂后，将底物溶液添加至孔中，并且颜色与初始步骤中结合的HMGCS1的数量成比例。

应用^[4][5]

用于胰岛素、格列本脲和二甲双胍对妊娠期糖尿病小鼠分别干预改善子代糖脂代谢研究

应用GDM小鼠模型,研究孕期进行胰岛素,二甲双胍和格列本脲干预对子代的葡萄糖和脂质代谢的影响。方法:实验前动物自由进食标准饲料,维持12 h光照和12 h黑暗的昼夜节律。实验室温度:23±2℃,湿度:50±5%,自由饮水。在上述环境适应1 w后,受试动物按2:1雌雄合笼,次日早晨7:00检查阴栓,查到阴栓定为交配成功,并定为GD0。在GD6,GD7,GD8连续3天腹腔内注射低剂量链脲佐菌素(STZ)40mg/kg诱导C57BL/6J小鼠成为GDM母鼠。尾静脉采血测血糖,72 h内空腹血糖≥11.1 mmol/L即为成功模型,正常对照组孕鼠腹腔注射等量生理盐水。怀孕母鼠随机分成4组(10只/组):妊娠糖尿病组(G组),妊娠糖尿病胰岛素干预组(GI组),妊娠糖尿病格列苯脲干预组(GG组),妊娠糖尿病二甲双胍干预组(GM组)。三个药物干预组从确诊为GDM母鼠那天起,每天接受单一种类药物治疗直至分娩。子代分别在第4周和第8周进行胰岛素耐量实验(ITT),葡萄糖耐量实验(GTT)。使用ELISA试剂盒分析子代小鼠血浆胰岛素含量。通过酶试剂盒分别测定子代小鼠血清和肝脏中的总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)的水平。进行蛋白质印迹实验检测子代小鼠肝脏中的胰岛素信号通路,葡萄糖和脂质代谢相关蛋白。结果:妊娠期间GDM母鼠通过胰岛素、格列本脲和二甲双胍分别干预能改善雄性子代小鼠血脂异常,肝脏脂质异常和胰岛素敏感性异常的情况,直至它们8周龄。具体而言,胰岛素,格列本脲和二甲双胍对GDM母鼠妊娠期的干预可改善4至8周龄雄性子代血浆TC,TG,LDL-C水平升高(P<0.05),肝脏脂质含量增加,可降低糖异生关键酶:葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase),磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK),三羟基三甲基辅酶A合成酶1(HMGCS1)水平(P<0.05),并显著改善蛋白激酶B(AKT)肝磷酸化水平降低,肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT1A)水平降低的情况(P<0.05)。

参考文献

[1]Adherence to a lifestyle programme in overweight/obese pregnant women and effect on gestational diabetes mellitus:a randomized controlled trial[J].Raffaele Bruno,Elisabetta Petrella,Valentina Bertarini,Giulia Pedrielli,Isabella Neri,Fabio Facchinetti.Maternal&Child Nutrition.2017(3)

[2]Glyburide Versus Metformin and Their Combination for the Treatment of Gestational Diabetes Mellitus:A Randomized Controlled Study[J].Zohar Nachum,Noah Zafran,Raed Salim,Noura Hissin,Jamal Hasanein,Yifat Gam Ze Letova,Abeer Suleiman,Enav Yefet.Diabetes Care.2017(3)

[3]Prenatal Food Restriction with Postweaning High-fat Diet Alters Glucose Metabolic Function in Adult Rat Offspring[J].Di Xiao,Hao Kou,Li Zhang,Yu Guo,Hui Wang.Archives of Medical Research.2017(1)

[4]Pharmacokinetics,efficacy and safety of glyburide for treatment of gestational diabetes mellitus[J].Malek,Davis.Expert Opinion on Drug Metabolism&Toxicology.2016(6)

[5]汪洋.胰岛素、格列本脲和二甲双胍对妊娠期糖尿病小鼠分别干预改善子代糖脂代谢[D].安徽医科大学,2019.