原代细胞培养基的应用

背景^[1-3]

原代细胞培养基是培养原代细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养原代细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培养基（cell culture medium）是人工模拟动物细胞的体内生长环境，维持体外细胞存活和增殖的营养物质基础，其主要功能是为细胞提供适宜的pH和渗透压，以及细胞本身不能合成的各种营养物质。

原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养，也叫初代培养。原代培养离体时间短，遗传性状和体内细胞相似，适于做细胞形态、功能和分化等研究。较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。

按照细胞培养基的发展历史，细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。

与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用合成培养基时必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的做法是添加5~10%的血清，这样才能维持细胞活力，促进细胞增殖。针对不同的动物细胞，现已开发了多种商业化、个性化的低血清细胞培养基配方，营养成份更加丰富，血清使用量可降低至1～3%，由此可减少了血清等动物来源成份对生物制品安全性的影响。

应用^[4][5]

用于人脐带间充质干细胞分离培养方法的研究

应用组织块贴壁法分离、培养人脐带间充质干细胞,观察采集脐带后不同处理时间、以及脐带冻存复苏后脐带间充质干细胞分离成功率、生长增殖情况等,探讨组织块贴壁分离法用于间充质干细胞大规模生产扩增的可行性。

实验采用DF12培养基对2-3mm3大小的人脐带组织块进行贴壁培养,观察不同处理时段的脐带组织原代细胞获得时间、细胞得率等情况。结果表明,24小时以内处理的组织细胞分离成功率100%(6/6),得到原代细胞的平均时间17.33±0.84天,平均得到4.03±0.97×104个细胞/cm；

24-48小时组的分离成功率为92%(11/12),得到原代细胞的平均时间为为22.00±1.72天,平均可获得1.22±0.24×104个细胞/cm；

48-72小时组的分离成功率降至87%(13/15),平均获得原代细胞的时间为21.69±2.15天,平均获得1.01±0.22×104个细胞/cm。

液氮储存复苏组分离成功率为100%(10/10),得到原代细胞的平均时间为20.60±2.13天,平均可获得2.08±0.30×104个细胞/cm。

结果表明,随着脐带组织处理时间延长,分离成功率下降,平均每厘米脐带组织获得原代细胞数量降低,脐带组织块冻存复苏后可以获得人脐带间充质干细胞。

参考文献

[1]Isolation and characterization of Oct-4+/HLA-G+mesenchymal stem cells from human umbilical cord matrix:differentiation potential and detection of new markers[J].Giampiero La Rocca,Rita Anzalone,Simona Corrao,Francesca Magno,Tiziana Loria,Melania Lo Iacono,Antonino Di Stefano,Pantaleo Giannuzzi,Lorenzo Marasà,Francesco Cappello,Giovanni Zummo,Felicia Farina.Histochemistry and Cell Biology.2008(2)

[2]Reproducible methodology for the isolation of mesenchymal stem cells from human umbilical cord and its potential for cardiomyocyte generation[J].Winston CostaPereira,ItaliaKhushnooma,ManishaMadkaikar,K.Ghosh.J Tissue Eng Regen Med.2008(7)

[3]Characterization of mesenchymal stem cells isolated from the human umbilical cord[J].Snejana Kestendjieva,Dobroslav Kyurkchiev,Gergana Tsvetkova,Tzvetozar Mehandjiev,Angel Dimitrov,Assen Nikolov,Stanimir Kyurkchiev.Cell Biology International.2008(7)

[4]Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells:Adjuvants for Human Cell Transplantation[J].Robb Friedman,Monica Betancur,Laurent Boissel,Hande Tuncer,Curtis Cetrulo,Hans Klingemann.Biology of Blood and Marrow Transplantation.2007(12)

[5]李铎.人脐带间充质干细胞分离培养方法的研究[D].北京协和医学院,2011.