人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理的应用

背景^[1-3]

人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理分离自成人皮肤，原代冻存，冰冻运输。每管细胞密度超过5x10^5/ml。细胞经形态和Fibronectin免疫荧光鉴定。本细胞经检测不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母菌和真菌。

成纤维细胞是来源于中胚层的一种间充质细胞。它被广泛应用于细胞和分子的研究。这主要是因为因为它是一种较容易培养的，耐受性较好的细胞，可应用于从基因转染到显微注射等多种操作。现已证明不同部位的成纤维细胞有着本质的不同，组织里的成纤维细胞处于一种动态的机械平衡之中，这种平衡影响着健康和已愈合软组织的结构完整性。成纤维细胞分泌一种非刚性细胞外基质，其中含有I型和III型胶原。此外真皮纤维细胞在炎症刺激下还能分泌大量透明质酸。在创伤愈合过程中，真皮成纤维细胞从迁移、再生表型转变为可收缩、基质再聚集表型。

丝裂霉素C是从头状链霉菌培养液中分离提取的一种广谱抗肿瘤抗生素，对多种癌症有抗癌作用，其作用原理可使细胞的DNA解聚，同时阻碍DNA的复制，从而抑制肿瘤细胞分裂。

丝裂霉素C为细胞周期非特异性药物，其抗肿瘤谱较广，作用迅速，但治疗指数不高，毒性较大。临床适用于消化道癌，如胃癌、肠癌、肝癌及胰腺癌等，疗效较好。对肺癌、乳腺癌、宫颈癌及绒毛膜上皮癌等也有效。还可用于恶性淋巴瘤、癌性胸腹腔积液。

应用^[4][5]

用于外周血来源的成体干细胞的体外培养鉴定以及在皮肤创伤修复中的作用研究

二维环境下通过共培养的方法观察CF细胞对皮肤组织细胞的作用影响;三维条件下通过体外构建复合CF细胞的组织工程人工皮肤,观察CF细胞对皮肤组织细胞的作用影响。

方法:1)以丝裂霉素C处理体外培养的原代CF细胞,使其成为类滋养层细胞;将体外分离培养的真皮成纤维细胞(Fibroblasts,FBs)和皮肤角阮细胞(Keratinocytes,KCs)与制备的类滋养层CF直接接触共培养,通过直接光镜观察、MTT法、BrdU-ELISA掺入法、流式细胞仪分析细胞周期以及细胞运动(划痕)实验(Scratch assay)等手段观察两种皮肤组织细胞在体外的形态和增殖变化。

2) 体外构建具有复合CF细胞的真皮层的组织工程人工皮肤,通过大体观察,HE染色组织学观察,Pan-CK免疫组织化学染色等手段研究三维环境下CF细胞对皮肤组织细胞的作用影响。

结果:1)丝裂霉素C处理后的CF细胞多次传代后基本停止增殖,经过与皮肤组织细胞的共培养后逐渐死亡;与类滋养层CF细胞共培养的FBs细胞形态基本没有明显变化,而KCs则形态变化明显,出现表皮去分化特征性的细胞形态;

MTT、BrdU-ELISA和流式细胞仪分析细胞周期显示共培养后的FBs增殖加快,而KCs则增值速度减慢,提示CF细胞促进FBs的增殖作用和对KCs的抑制作用;细胞划痕试验则显示共培养后的FBs细胞移行能力加强,而KCs则呈现相反的趋势。

参考文献

[1]A unique human blood-derived cell population displays high potential for producing insulin[J].Yong Zhao,Zhihua Huang,Ping Lazzarini,Yong Wang,Anke Di,Meiling Chen.Biochemical and Biophysical Research Communications.2007(1)

[2]Global Expression Profiling of Fibroblast Responses to Transforming Growth Factor-β1 Reveals the Induction of Inhibitor of Differentiation-1 and Provides Evidence of Smooth Muscle Cell Phenotypic Switching[J].Rachel C.Chambers,Patricia Leoni,Naftali Kaminski,Geoffrey J.Laurent,Renu A.Heller.The American Journal of Pathology.2003(2)

[3]Plasticity of hair follicle dermal cells in wound healing and induction[J].A.Gharzi,A.J.Reynolds,C.A.B.Jahoda.Experimental Dermatology.2003(2)

[4]Differentiation of Muscle-Derived Cells into Myofibroblasts in Injured Skeletal Muscle[J].Yong Li,Johnny Huard.The American Journal of Pathology.2002(3)

[5]刘鹏.外周血来源的成体干细胞的体外培养鉴定以及在皮肤创伤修复中的作用研究[D].第四军医大学,2008.