胸腺上皮细胞生长因子的应用

背景^[1-3]

胸腺上皮细胞生长因子是人体内分泌的一种重要细胞生长因子，有很强的生理活性。研究发现，EGF能促进上皮细胞、成纤维细胞的增值；增强表皮细胞的活力；延缓表皮细胞的老化，使肌肤各组成成份保持生理状态。高活性的EGF才能促进皮肤细胞的分裂和生长，此外它还能刺激细胞外一些大分子（如透明质酸和胶原白等）的合成与分泌、滋润皮肤，是决定肌肤活力和健康的源泉。重组人表皮生长因子（rh-EGF），大量存在于人体上皮细胞内，它可刺激上皮细胞和内皮细胞生长，使新的表皮细胞不断长成，将死皮层推动并逐渐脱落。

上皮细胞有被膜下上皮细胞和星形上皮细胞两种。被膜下上皮细胞与结缔组织相邻的一侧呈完整的扁平上皮状，有基膜，相邻细胞间有许多桥粒连接，细胞的另一侧则有一些突起。有的细胞的胞质较丰富，胞质内含有一些内吞的胸腺细胞，类似胸腺分离细胞中所见的哺育细胞。

哺育细胞为一大的圆形或椭圆形细胞，胞质内含有数个乃至数十个胸腺细胞，有的还进行有丝分裂，它们是Th细胞的前身。被膜下上皮细胞能分泌胸腺素和胸腺生成素。星形上皮细胞即通常所称的上皮性网状细胞，细胞多分支状突起，突起间以桥粒相互连接成网，细胞表面标志不同于被膜下上皮细胞，但与胸腺小体上皮细胞的相同。表面具有大量的MHC抗原。此种细胞不分泌激素，其质膜紧贴胸腺细胞，有诱导胸腺细胞发育分化的作用。

应用^[4][5]

用于胚胎干细胞源性胸腺上皮祖细胞表达少突胶质细胞糖蛋白对实验性多发硬化症的防治作用研究

通过建立小鼠MS动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE),将引起MS的关键致病性抗原髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)过表达在m ESCs来源的TEPs(m ESC-TEPs)内,胸腺内移植,研究其是否能分化为TECs,改善胸腺微环境,促进T细胞发育,同时MOG在胸腺内持续表达,诱导针对MOG抗原的特异性耐受,达到防治MS的目的;

并探讨防治作用的相关机制,是否与中枢耐受(自身抗原特异性T细胞删除或抑制)或/和外周耐受(抗原特异性Tregs增加)机制有关。

方法:利用基因克隆和转染技术,构建带有绿色荧光蛋白GFP的重组质粒MOG-p EF1a-IRES-Ac GFP,转染TC-1 m ESCs,筛选获得MOG稳定表达的细胞株MOG/m ESCs。

利用细胞因子表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子7/角质细胞生长因子(FGF7/KGF)、FGF10和骨形成蛋白4(BMP4)联合体外培养,诱导MOG/m ESCs分化为胸腺上皮祖细胞(MOG/TEPs)。

取4-6周129S6Sv Ev Tac小鼠12只,分4组,每组3只进行胸腺内注射:实验组为注射MOG/TEPs基因转染细胞组、对照组分别为注射p EF1a/TEPs空载体转染细胞组、MOG/聚乙烯亚胺(PEI)质粒组和p EF1a/PEI空载体组。

分别于注射后第2天、第30天和第90天取胸腺组织,Western blot、和流式细胞术(FACS)分析比较各组胸腺移植后,m ESC-TEPs数量、分布以及绿色荧光蛋白(GFP)和MOG蛋白持续表达情况。

参考文献

[1]Administration of embryonic stem cell-derived thymic epithelial progenitors expressing MOG induces antigen-specific tolerance and ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis[J].Min Su,Yinhong Song,Zhixu He,Rong Hu,Debra Rood,Laijun Lai.Journal of Autoimmunity.2015

[2]Environmental risk factors and multiple sclerosis:an umbrella review of systematic reviews and meta-analyses[J].Lazaros Belbasis,Vanesa Bellou,Evangelos Evangelou,John P A Ioannidis,Ioanna Tzoulaki.The Lancet Neurology.2015(3)

[3]Polyethyleneimine-DNA Interactions[J].T.J.Thomas,Sripriya Venkiteswaran.Biophysical Journal.2014(2)

[4]Human Neural Precursor Cells Promote Neurologic Recovery in a Viral Model of Multiple Sclerosis[J].Lu Chen,Ronald Coleman,Ronika Leang,Ha Tran,Alexandra Kopf,Craig M.Walsh,Ilse Sears-Kraxberger,Oswald Steward,Wendy B.Macklin,Jeanne F.Loring,Thomas E.Lane.Stem Cell Reports.2014(6)

[5]苏敏.胚胎干细胞源性胸腺上皮祖细胞表达少突胶质细胞糖蛋白对实验性多发硬化症的防治作用[D].贵阳医学院,2015.