脐血间质干细胞成骨诱导分化培养基的应用

背景^[1-3]

脐血间质干细胞成骨诱导分化培养基适用于脐血间质干细胞成脂诱导分化使用，使用该产品进行脐血间质干细胞成脂诱导时能够有效提高诱导效率。脐带间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景。

在新生儿脐带组织中脐静脉周围存在一层富含间充质干细胞的凝胶状物质，称作华通氏胶，从这一胶质层中提取分离得到的间充质干细胞就被称为脐带间充质干细胞。间充质干细胞是干细胞的一种，因能分化为间质组织而得名，具有亚全能分化潜能，在特定的体内外环境下，能够诱导分化成为多种组织细胞。间充质干细胞具有干细胞的共性，即自我更新、多向分化和归巢的能力。间充质干细胞具有向多种类型细胞分化的能力，可以分化为神经、心脏、肝脏、骨、软骨、肌腱、脂肪、上皮等多种细胞。

培养方法

取新鲜健康脐带，用PBS冲洗干净后，用剪刀镊子剔去血管，剥出里面的华氏胶组织，将所得组织充分剪碎至1 mm3大小，加入α-MEM培养液置于37℃，5%的CO2培养箱培养，培养液中含10%FBS，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素。脐带组织培养5-7天后，可见有部分细胞从组织块周围爬出，形态呈细小的梭形，一周后，细胞开始迅速增殖，形成大小不等的细胞集落，待细胞长满后，用0.25%胰蛋白酶消化传代。

应用^[4][5]

用于人脐血源间充质干细胞与其基质细胞对体外造血调控作用的比较研究

通过比较人脐血源基质细胞和人脐血源间充质干细胞体外有关生物学特点及其对人脐血CD34~+造血干细胞的粘附率、迁移率；对人脐血CD34~+造血干细胞诱导分化作用等方面探讨来揭示人脐血源基质细胞和间充质干细胞体外支持、调控造血作用的特点，以丰富对人脐血源基质细胞和间充质干细胞的全面认识，为今后人脐血源基质细胞的临床科学应用提供理论和实验依据。

方法：

人脐血源间充质干细胞和人脐血源基质细胞的分离培养及其细胞生物学特性的比较、

1. 人脐血源间充质干细胞(hUCBDMSCs)和人脐血源基质细胞(hUCBDSCs)的体外分离培养。健康婴儿(足月胎龄)脐带血在4小时内经6%的明胶沉降红细胞后，用1.077g/l的Percoll淋巴细胞分离液，密度梯度离心获得单个核细胞(mononuclear cell,MNC)。所得单个核细胞分别在改良Dexter体系培养hUCBDSCs，在间充质干细胞专门培养基(mesenchymal stem cell medium,MSCM)培养hUCBDMSCs。

2. 倒置显微镜下观察两类细胞的形态、贴壁、集落形成，细胞伸展及融合情况；采用CCK-8法和Transwell法分别检测两类细胞的体外增殖、粘附和对hUCB-MNCs迁移的影响；两类细胞周期及细胞表面抗原的流式检测(细胞表面抗原选择：Fn、Lm、CD45、CD29、CD44、CD34、Stro-1和CD106)。

3.两类细胞向成骨、成脂、成软骨细胞诱导分化的检测。用茜素红染色检测成骨情况，用油红染色检测成脂情况，用阿辛蓝染色检测成软骨情况。

参考文献

[1]Human umbilical cord blood-derived stromal cells prevent graft-versus-host disease in mice following haplo-identical stem cell transplantation[J].Lei Hao,Lei Gao,Xing-Hua Chen,Zhong-Min Zou,Xi Zhang,Pei-Yan Kong,Cheng Zhang,Xian-Gui Peng,Ai-Hua Sun,Qing-Yu Wang.Cytotherapy.2011(1)

[2]Cotransplantation of human umbilical cord blood-derived stromal cells enhances hematopoietic reconstitution and engraftment in irradiated BABL/c mice[J].Ying Liu,Long Yi,Xi Zhang,Lei Gao,Cheng Zhang,Yi-mei Feng,Xing-hua Chen.Cancer Biology&Therapy.2011(1)

[3]Simultaneous expansion and harvest of hematopoietic stem cells and mesenchymal stem cells derived from umbilical cord blood[J].Song Kedong,Fan Xiubo,Liu Tianqing,Hugo M.Macedo,Jiang LiLi,Fang Meiyun,Shi Fangxin,Ma Xuehu,Cui Zhanfeng.Journal of Materials Science:Materials in Medicine.2010(12)

[4]Hypothesis:Human Umbilical Cord Blood-derived Stromal Cells Promote Megakaryocytopoiesis Through the Influence of SDF-1 and PECAM-1[J].Yimei Feng,Xinghua Chen,Lei Gao.Cell Biochemistry and Biophysics.2010(1)

[5]孙浩平.人脐血源间充质干细胞与其基质细胞对体外造血调控作用的比较研究[D].第三军医大学,2012.