Α-促黑素细胞刺激素药盒操作说明书

背景^[1-3]

Α-促黑素细胞刺激素（α-Melanocyte Stimalating Hormoneα-MSH）是一种内源性的神经调节肽，人类垂体细胞及许多垂体外细胞都可产生。通过与其受体结合发挥作用。在生理状态下，αMSH在体内的浓度非常低，变化范围小。当机体产生炎症时，αMSH在血桨中浓度增高，αMSH具有强有力的抗炎免疫调节能力，抑制前炎症细胞因子的生成及活性，使巨噬细胞合成一氧化氮减少，抑制中性粒细胞的趋化性，调整前列腺素的合成，促进抗生细胞因子IL-10的合成。

药盒组成：

1、125I-αMSH（冻干品）

2、αMSH抗体（冻干品）

3、标准品β-EP（冻干品），浓度分别为0、0.5、1、2、4、8ng/ml

4、分离剂(第二抗体)

5、缓冲液

实验步骤：

取组织（米粒大小），立即称重后加到1ml 100℃生理盐水中煮沸5分钟后迅速冷却，再加0.5ml 1N醋酸制成匀浆，置4℃1-2小时后离心2000 G 15分钟，取上清，冷冻干燥后用RIA缓冲液复溶，进行RIA测定。或煮沸迅速冷却后用0.1N盐酸制成匀浆，置4℃1-2小时后再用0.1N NaOH中和，离心取上清液-20℃保存待测。振荡3分钟，3000转/分离心15分钟，弃上清，测沉淀计数cpm。

结果计算：

以N/T、B/T计算NBS、S0结合百分率，以B/B0计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。

应用^[4][5]

用于父代高血糖改变子代下丘脑摄食调节神经通路加速肥胖形成的分子机制研究

妊娠期合并糖尿病可引起子代代谢紊乱,增加子代患糖尿病和其他代谢性疾病的风险。而父代高血糖对子代的影响目前研究较少,且集中于流行病学调查和临床特征的观察,缺乏深度的机制研究。

HE染色观察脂肪组织脂质沉积情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中瘦素(Leptin)和a-黑素细胞刺激素(a-MSH)水平;实时荧光定量PCR(real-time q-PCR)检测子代下丘脑中瘦素受体(Lepr)、神经肽Y(NPY)、阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)、细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS3)、前蛋白转化酶1(PC1)和2(PC2)、羧肽酶E(CPE)以及冷刺激下棕色脂肪组织中解偶联蛋白(UCP1)的m RNA表达水平;

蛋白免疫印迹法(western blotting)检测下丘脑中瘦素信号通路相关基因磷酸化的信号转导和转录激活因子-3(p-STAT3)和SOCS3的蛋白表达水平;免疫组化石蜡切片法(IHC-P)检测两组子代棕色脂肪组织中UCP1的相对表达。

参考文献

[1]Male-lineage transmission of an acquired metabolic phenotype induced by grand-paternal obesity[J].Jennifer E.Cropley,Sally A.Eaton,Alastair Aiken,Paul E.Young,Eleni Giannoulatou,Joshua W.K.Ho,Michael E.Buckland,Simon P.Keam,Gyorgy Hutvagner,David T.Humphreys,Katherine G.Langley,Darren C.Henstridge,David I.K.Martin,Mark A.Febbraio,Catherine M.Suter.Molecular Metabolism.2016(8)

[2]Paternal Psychological Stress Reprograms Hepatic Gluconeogenesis in Offspring[J].Ling Wu,Yan Lu,Yang Jiao,Bin Liu,Shangang Li,Yao Li,Fengying Xing,Dongbao Chen,Xing Liu,Jiejie Zhao,Xuelian Xiong,Yanyun Gu,Jieli Lu,Xuejin Chen,Xiaoying Li.Cell Metabolism.2016

[3]Disruption of histone methylation in developing sperm impairs offspring health transgenerationally[J].Siklenka Keith,Erkek Serap,Godmann Maren,Lambrot Romain,McGraw Serge,Lafleur Christine,Cohen Tamara,Xia Jianguo,Suderman Matthew,Hallett Michael,Trasler Jacquetta,Peters Antoine H.F.M.,Kimmins Sarah.Science.2015(6261)

[4]Transgenerational epigenetic programming via sperm microRNA recapitulates effects of paternal stress[J].Rodgers Ali B.,Morgan Christopher P.,Leu N.Adrian,Bale Tracy L..Proceedings of the National Academy of Sciences.2015(44)

[5]石小琴.父代高血糖改变子代下丘脑摄食调节神经通路加速肥胖形成的分子机制研究[D].重庆医科大学,2017.