L6细胞的应用

背景^[1-3]

L6细胞是Yaffe在甲基胆蒽存在的情况下从大鼠大腿肌原代培养的最初两代细胞中分离得到的；在培养基中融合形成多核的肌管和横纹肌纤维，细胞融合的程度随着代数的增加而下降，因此细胞应低代次冷冻并周期性地重新克隆以选择融合能力强的细胞。该细胞应在达汇合状态前传代，以延缓细胞分化能力的丧失，如果让培养容器中的细胞长满，这株细胞的成肌组分将迅速耗尽。

成肌细胞（myoblast）是在成骨骼肌组织中发现的在创伤后重建肌肉组织的前体细胞，有关骨骼肌成肌细胞的研究较早并有较多的动物和临床研究。

从骨骼肌中分离获得的肌卫星细胞在体外分du离培养时被统称为成肌细胞。

骼肌中的肌卫星细胞，长期以来就被认为是出生后骨骼肌生长、修复和维持的单能成肌干细胞。近年研究发现，肌卫星细胞与内皮细胞共同起源于胚胎血管祖细胞，且成年骨骼肌中存在多能干细胞,这些肌源多能干细胞在适当的微环境中具有多向分化潜能。

肌细胞生成素（myogenin，MyoG）基因是生肌决定因子，基因家族中唯一在所有骨骼肌细胞系均可表达的基因，是骨骼肌分化所必需的因子，其功能不可被其它生肌调节因子所代替，通过控制成肌细胞的融合和肌纤维的形成来对肌肉的分化起关键作用。作为一种肌细胞特异性转录因子，MyoG基因具有以下三个功能：

①调节自身基因的表达；

②与生肌因子其它成员相互作用，调节彼此基因的表达；

③调节肌肉特异基因的表达。

应用^[4][5]

用于谷氨酰胺改善大鼠L6细胞胰岛素受体信号通路影响葡萄糖摄取的分子机制研究

高糖培养的大鼠骨骼肌成肌细胞L6后,L6细胞葡萄糖摄取的改变以及对胰岛素敏感性的改变。

在细胞的基因和蛋白分子水平上,采用RT-PCR(polymerase chain reaction)法和Western Blotting法深入地探讨Gln对胰岛素受体信号通路PI3K/PDK1/AKT/PKCζ以及GLUT4表达和转位影响。并且采用免疫荧光的方法验证Gln增强L6细胞GLUT4表达和转位的作用。

用不同浓度的谷氨酰胺干预高糖培养的L6细胞,检测L6细胞葡萄糖摄取改变,采用Western Blotting法检测不同浓度谷氨酰胺干预后,胰岛素受体信号通路中的PI3K、AKT和GLUT4蛋白表达的改变。

方法:对L6细胞进行Gln和Insulin干预之前,将对数期的L6细胞进行饥饿处理(培养基无牛血清和Gln)12 h,对细胞进行分组高糖干预(高糖培养基葡萄糖浓度为33 mmol/L),细胞分成六组:无Gln无Insulin无L-谷氨酰基-4-硝基苯胺(GPNA)对照组(对照组);无Gln有Insulin无GPNA干预组(Insulin干预组);有Gln无Insulin无GPNA干预组(Gln干预组);有Gln无Insulin有GPNA干预组(Gln+GPNA干预组);有Gln有Insulin无GPNA干预组(Gln+Insulin干预组);有Gln有Insulin有GPNA干预组(Gln+Insulin+GPNA干预组),然后对各组细胞分别进行不同的药物干预24 h。

参考文献

[1]Mechanisms of insulin resistance in the amygdala:Influences on food intake[J].Maria Fernanda Condes Areias,Patricia Oliveira Prada.Behavioural Brain Research.2015

[2]Gallic acid attenuates high-fat diet fed-streptozotocin-induced insulin resistance via partial agonism of PPARγin experimental type 2 diabetic rats and enhances glucose uptake through translocation and activation of GLUT4 in PI3K/p-Akt signaling pathway[J].Gopalsamy Rajiv Gandhi,Gnanasekaran Jothi,Poovathumkal James Antony,Kedike Balakrishna,Michael Gabriel Paulraj,Savarimuthu Ignacimuthu,Antony Stalin,Naif Abdullah Al-Dhabi.European Journal of Pharmacology.2014

[3]Effect of glutamine supplementation on cardiovascular risk factors in patients with type 2 diabetes[J].Asieh Mansour,Mohammad Reza Mohajeri-Tehrani,Mostafa Qorbani,Ramin Heshmat,Bagher Larijani,Saeed Hosseini.Nutrition.2014

[4]The influence of parenteral glutamine supplementation on glucose homeostasis in critically ill polytrauma patients—A randomized-controlled clinical study[J].Ioana Marina Grintescu,Irina Luca Vasiliu,Ioana Cucereanu Badica,Liliana Mirea,Daniela Pavelescu,Andreea Balanescu,Ioana Cristina Grintescu.Clinical Nutrition.2014

[5]王才娟.谷氨酰胺改善大鼠L6细胞胰岛素受体信号通路影响葡萄糖摄取的分子机制研究[D].天津医科大学,2018.