PIEC细胞专用培养基的应用

背景^[1-3]

PIEC细胞专用培养基适用于PIEC细胞各个时期的无菌培养。PIEC细胞专用培养基包含PIEC细胞生长所需的各种物质，不需要额外添加血清和其他成分可直接用于PIEC细胞的体外培养。

PIEC细胞是来源于猪髋动脉内皮细胞，生长形态为上皮样贴壁生长。

培养条件

1．无菌环境

无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。

3.适宜的渗透压

高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。

4．气体环境与pH

细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。

液体培养基保存：

液体培养基应于4℃冰箱避光保存，实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良，可以再添加适量L-谷氨酰胺。

应用^[4][5]

用于伏马毒素B1对猪血管内皮细胞氧化损伤和凋亡的影响研究

以猪血管内皮细胞（PIEC）为对象,研究了FB1对PIEC的毒性,探讨FB1对细胞的氧化损伤以及细胞凋亡的影响,为伏马毒素对动物的毒性研究提供依据。研究目的:以PIEC细胞为研究对象,通过不同浓度的FB1毒染PIEC细胞,探讨FB1对PIEC细胞的毒性作用。

研究方法:采用体外培养的方法来获取对数生长期的PIEC细胞,用不同浓度的FB1（10,25,50μg/ml）染毒PIEC细胞。通过细胞增殖试验（MTT法）确定FB1剂量与作用时间,显微镜观察细胞凋亡的形态。

FB1毒染PIEC细胞48h后,硝酸还原酶法检测NO的含量;硫代巴比妥酸法测定细胞中MDA的含量;钼酸铵法检测CAT的活性;TNB法测定细胞中TrxR的活性;氮蓝四唑（NBT）显色法检测SOD的活性;间接法检测GSH的含量以及GSH-PX的活性;Annexin-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,用荧光探针DCFH-DA和JC-1法分别进行ROS含量以及线粒体膜电位的检测;荧光定量PCR检测凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3,Caspase-9 mRNA的表达。

研究结果:细胞增殖试验筛选出FB1的作用时间为48h,细胞存活率在70%左右。高剂量组的FB1能够抑制细胞增殖（P<0.05）,能显著升高MDA和降低NO的含量（P<0.05）以及显著降低SOD活性（P<0.05）

参考文献

[1]Development of a nanoarray capable of the rapid and simultaneous detection of zearalenone,T2-toxin and fumonisin[J].Sara E.McNamee,Francesca Bravin,Giulia Rosar,Christopher T.Elliott,Katrina Campbell.Talanta.2017

[2]Inhibition of Pro-Apoptotic BAX by a Noncanonical Interaction Mechanism[J].Lauren A.Barclay,Thomas E.Wales,Thomas P.Garner,Franziska Wachter,Susan Lee,Rachel M.Guerra,Michelle L.Stewart,Craig R.Braun,Gregory H.Bird,Evripidis Gavathiotis,John R.Engen,Loren D.Walensky.Molecular Cell.2015(5)

[3]Oxidative stress:a concept in redox biology and medicine[J].Helmut Sies.Redox Biology.2015

[4]In vivo toxicity studies of fusarium mycotoxins in the last decade:A review[J].L.Escrivá,G.Font,L.Manyes.Food and Chemical Toxicology.2015

[5]蒋艳成.伏马毒素B_1对猪血管内皮细胞氧化损伤和凋亡的影响[D].湖南农业大学,2017.