紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯的制备

背景及概述^[1][2]

土茯苓为百合科植物光叶菝锲(Smilax glabra Roxb.)的干燥根茎，它是一种常用中药材，具有除湿，解毒通利关节的作用。

紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯(astilbin)是土茯苓中分离得到的一种黄酮类化合物，具有杀虫，抑制辅酶A还原酶，抑制醛糖还原酶，保肝，镇痛，抗水肿，抗氧化等活性作用。其结构式为：

紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯

应用^[3]

紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯具有杀虫、抑制辅酶A还原酶、抑制醛糖还原酶、肝保护、镇痛、抗水肿、抗氧化等活性，紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯还能显著改善免疫性肝损伤，诱导PHA活化的Jurkat细胞凋亡，通过抑制活化T淋巴细胞的功能来抑制迟发型超敏反应和治疗小鼠胶原型关节炎等。

制备^[2]

文献中也记载了一些紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯的制备方法，有些是从黄杞叶中分离得到的。也有从土茯苓中分离得到的，但是大多采用的方法是在水饱和的正丁醇萃取以后再用大孔树脂分离以及HPLC分离制备，所涉及的工艺复杂，成本较高，所获得紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯纯度并没有达到98％以上。

高纯度紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯制备方法

将土茯苓粉碎过20目筛，以7倍于土茯苓重量，浓度为80％乙醇水溶液渗漉提取6个小时，合并乙醇水溶液提取液。回收乙醇水溶液，浓缩至无醇味。过大孔树脂D101，然后分别用10％，30％和70％的甲醇水溶液洗脱。收集70％甲醇水溶液洗脱所得洗脱液，浓缩至每毫升含生药5.5g。加入大量丙酮，析出沉淀，此沉淀为紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯粗品。用甲醇溶解沉淀，过C18柱，用26％的甲醇水溶液洗脱，收集含有紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯的洗脱液，洗脱液挥去溶剂后，经40％的乙醇重结晶，得紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯单体，经检测紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯含量在98％以上。

从土茯苓中提取紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯的方法：

A）、取土茯苓药材洗净后粉碎过20目筛，加入浓度为60%的乙醇水溶液混匀，料液重量比为土茯苓药材：乙醇水溶液=1：10，浸泡0.5h后，取容积30L的料液，采用功率1500±10%W，频率26～40 KHz的超声波，转速3～16r/min，以低温温度20～50℃提取30min后经常规过滤得提取液；

B）、取上述的提取液加入乙酸乙酯，体积比为提取液：乙酸乙酯=1：1，搅拌混匀后萃取，反复萃取次3次，合并乙酸乙酯层；

C）、将上述的乙酸乙酯层以低温温度20～40℃真空浓缩后，回收乙酸乙酯，得到浓缩液；

D）、将上述的浓缩液加入浓度为50%的乙醇水溶液稀释，稀释至相当于含生药0.25～1g/ml的溶液，溶液经高速离心沉淀后上清，上清液依次通过微滤一级膜、超滤二级膜分离大分子物质，再经纳滤三级膜分离小分子杂质，收取得到浓缩药液；一级膜为微滤膜，膜孔径为200~2000nm，二级膜为超滤膜，采用截留分子量为8000~100000Dal的超滤膜，三级膜为纳滤膜，采用截留分子量为100~500Dal的纳滤膜，收取得到浓缩药液；

F）、上述紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯湿纯品经低温干燥后得到含水量＜5%的紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯纯品。

从黄杞叶中提取紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯的方法：

将黄杞叶药材粉碎成粗粉，用药材重量10倍的95％乙醇与15倍量的80％乙醇分别渗漉提取，收集渗漉液。95％乙醇提取液用石油醚脱脂后，浓缩至浸膏，加入乙醇使溶液浓度为20％的乙醇水溶液，溶解后放置析沉淀，分取沉淀，母液与80％乙醇提取液合并，浓缩至每毫升3克生药，用相当于生药2倍量的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物浓缩至浸膏，加入乙醇水溶液使溶液浓度为20％的乙醇水溶液，溶解后放置析沉淀。分取沉淀，将两次醇沉所得沉淀合并，水溶解后过聚酰胺柱，用蒸馏水洗涤柱床，用60％重量乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥去溶剂后，20％重量乙醇水溶液重结晶得紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯，重结晶后母液挥去醇后再过聚酰胺柱，60％重量乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥去溶剂后再用20％重量乙醇水重结晶。得紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯，提取率为51.4％，紫杉叶3-O鼠李甲基酸酯含量为90％。

主要参考资料

[1] 宋少华, 沈筱芸, 刘芳, 唐乙, 王振猛, & 傅志仁. (2009). 落新妇苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用. 结合医学学报:英文版, 007(008), 753-757.

[2] 陈幸, 李彬, 黎万寿, & 吴燕. (2004). Hplc法测定土茯苓中落新妇苷的含量. 药物分析杂志(4), 437-439.

[3] 慕宁, 王海梁, 傅宏, 林峰, 施晓敏, & 邹绍武等. (2008). 落新妇苷通过促进il-10表达保护小鼠缺血再灌注损伤肝脏. 第二军医大学学报, 029(012), 1429-1432.