BRL-3A细胞的应用

大鼠肝细胞BRL-3A的简介^[1]

名称：BRL-3A (大鼠肝细胞) (种属鉴定正确)

种属：大鼠

组织来源：肝

生长特性：贴壁细胞

细胞形态：上皮细胞样

生物安全等级：1

生长培养基：DMEM(PM150210) + 10% FBS(164210-500) + 1% P/S(PB180120)

推荐传代比例：1:2-1:4

推荐换液频率：2~3次周

冻存条件：冻存液: 55%基础培养基+40%FBS + 5%DMSO ；温度:液氮

培养条件：气相:空气, 95%; CO₂, 5%；温度: 37°C

保藏机构：RCB; RCB0273

收到细胞后操作^[1]

收到细胞以后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后将小管细胞转移至T25 培养瓶或6cm 培养皿（不需要离心），加入5ml 左右含FBS 的培养基均匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞汇合度：若未超过80%汇合度，换液继续培养，根据情况传代或者冻存。若超过80%汇合度，可直接进行传代（细胞贴壁处理方法）。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热，然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大约10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的次传代一般是一传三。

主要参考文献

[1] 姚娟娟，周晓蓉，牛廷勇；单壁碳纳米管对大鼠肝细胞株BRL-3A的毒性作用。《毒理学杂志》。