通用细胞冻存液(无血清)的使用说明书

通用细胞冻存液(无血清)的简介^[1]

随着实验室细胞培养的发展，除了原代培养之外，人工开发出来的细胞系的保存越来越重要。细胞冷冻的原理在于尽可能降低细胞内的晶体形成，减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，从提高细胞复苏时的存活率。细胞冻存的数量应保证复苏时低温保护剂获得稀释，稀释后的细胞浓度扔高于正常传代的细胞浓度为宜，这是因为当低温保护剂稀释以后，该浓度一般不会对细胞造成毒性损伤。

通用细胞冻存液(无血清)主要由培养基、DMSO 等组成，不含血清，是一种经典的无菌冻存液。用于各种哺乳动物原代细胞、传代细胞系、杂交瘤细胞等的冻存。

冷冻保存细胞系的优点如下

1、减少基因漂移;

2、减缓细胞系的衰老;

3、稳定表型;

4、减少微生物污染及交叉污染机会等。

操作步骤^[1]

1、培养细胞至对数生长晚期，显微镜观察其外观、形态、有无污染等，取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞，用胰蛋归酶消化并用完全培养基终止消化，进行细胞计数;如为悬浮生长细胞，进行细胞计数。

2、离心，弃上清。

3、加入适量的通用细胞冻存液，重悬细胞，使细胞浓度达到/ml，置于冻存管中，密闭、不要拧的太紧，避免弯曲变形。

4、一般进行冷冻。亦可采用-20°C 30min, -70°C 过夜，最后置于液氮罐中长期存储。

主要参考文献

[1] 李红霞  李瑞娇  张汝月  张引红  郭兴萍; 小鼠子宫内膜间充质干细胞的分离、培养及鉴定。《山西医科大学学报》 2019年09期。