透析型胎牛血清LONSERA应用

背景^[1-3]

透析型胎牛血清LONSERA是通过0.1um膜透析去除胎牛血清中的一些小分子物质，如葡萄糖、盐类、非蛋白结合分子。透析处理采用超滤能够去除分子质量小于10，000Da的分子，过程中无法去除激素但可能会降低一些类型细胞的生长能力。

胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。

显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

牛血清是细胞培养中用量的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

应用^[4][5]

用于间充质干细胞及其因子对腹透相关性腹膜纤维化的影响研究

采用6-8周龄的雄性SD大鼠24只,随机分为盐水对照组(n=6),腹膜纤维化组(n=6),治疗组1(n=6)以及治疗组2(n=6)。以腹腔注射腹膜透析液的方法构建大鼠腹膜透析模型。除盐水对照组外各组大鼠均按照100ml/kg的剂量隔日腹腔注射4.25%腹膜透析液,共28天。而盐水对照组大鼠按100ml/kg的剂量隔日腹腔注射生理盐水,共28天。

治疗组1于注射腹膜透析液的第7天以及第14天给予腹腔注射1ml人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCSs)(2×10~6)治疗。治疗组2于注射腹膜透析液的第14天以及第21天给予腹腔注射1ml MSCs(2×10~6)治疗。2

8天后取各组腹膜透析液进行腹膜平衡试验,并留取腹膜组织进行HE染色,Masson三色染色和免疫组化染色以观察大鼠腹膜纤维化程度以及上皮细胞间充质细胞转分化(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量。

细胞实验:正常对照组:采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养人腹膜间皮细胞48h。纤维化组:以含2.5%葡萄糖的10%胎牛血清RPMI-1640培养基培养人腹膜间皮细胞48小时诱导其纤维化。治疗组:同纤维化组相同,以高糖培养基培养人腹膜间皮细胞24小时,改用分别含有50%、20%、10%、5%人脐带间充质干细胞上清液的高糖培养基继续培养24h。

参考文献

[1]Use of an alpha-smooth muscle actin GFP reporter to identify an osteoprogenitor population[J].Zana Kalajzic,Haitao Li,Li-Ping Wang,Xi Jiang,Katie Lamothe,Douglas J.Adams,Hector L.Aguila,David W.Rowe,Ivo Kalajzic.Bone.2008(3)

[2]Challenges to Human Embryonic Stem Cell Patents[J].Aurora Plomer,Kenneth S.Taymor,Christopher Thomas Scott.Cell Stem Cell.2008(1)

[3]A Scientist’s View of the Ethics of Human Embryonic Stem Cell Research[J].Anne McLaren.Cell Stem Cell.2007(1)

[4]Mesenchymal stem cell tissue engineering:Techniques for isolation,expansion and application[J].Ippokratis Pountos,Diane Corscadden,Paul Emery,Peter V.Giannoudis.Injury.2007

[5]杭天宇.间充质干细胞及其因子对腹透相关性腹膜纤维化的影响[D].中国医科大学,2018.