特级马血清应用

背景^[1-3]

特级马血清是用健康FPS蒙古马制得的无菌血清，较普通级马血清溶血现象更少。10%的马血清可以代替FBS支持抗srbc体外抗体细胞的培养。此外马血清可用于产生C2异质核子以及初级神经元培养。基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5－20％。特殊用途的血清来源需用经验确定。广泛应用的血清种类有马血清与牛血清，胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其做增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。而马血清常常用来做有丝分裂后的神经元培养。

然而，很多人也将胎牛血清用于神经元培养，也有人用马血清来培养胶质细胞。马血清纯天然制品，含有丰富的蛋白，可以替换FBS用于大多数哺乳动物细胞的培养，不宜用于昆虫细胞的培养。马血清含有更多的生长因子，尤其适用于造血干细胞的培养。另外马血清还可以用于原代神经细胞的培养和支原体的培养。

马血清还可以用于异核体细胞的形成、绵羊红细胞的体外抗体反应以及肌肉细胞的诱导分化等。

细胞培养中血清的作用

1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物.

2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力.

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用.

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源.

5.起酸碱度缓冲液作用.

应用^[4][5]

用于绵羊骨骼肌卫星细胞的体外培养和诱导分化研究

以绵羊骨骼肌卫星细胞作为研究对象,重点探讨卫星细胞的分离、纯化及体外培养方法,并对得到的细胞进行鉴定,旨在建立可稳定传代的绵羊卫星细胞系及其鉴定方法,为今后绵羊骨骼肌卫星细胞在家畜繁育和再生医学等相关方面的研究和应用提供实验依据。

用两步酶消化法和差速贴壁法分离和纯化绵羊骨骼肌卫星细胞,并对其进行鉴定和诱导分化,分析其多能性。

结果表明,1.1%Ⅰ型胶原酶和0.25%胰蛋白酶两步消化法分离绵羊骨骼肌卫星细胞效率较高,含20%FBS+10%马血清的培养基更有利于绵羊骨骼肌卫星细胞的体外培养。

用免疫组化和流式细胞术检测绵羊骨骼肌卫星细胞中几个标记基因Desmin、α-SarcOmeric Actinin、MyOD1、Myf5和PAX7的表达情况,得到的细胞中这5个基因表达均呈阳性,说明分离得到的细胞为绵羊骨骼肌卫星细胞。

为验证其多能性,将分离得到的卫星细胞向成肌、成脂和成骨三个方向诱导。成肌诱导后形成明显的多核肌管细胞,标记基因MyoG表达阳性,快肌肌球蛋白细胞免疫荧光染色呈阳性；成骨诱导后经茜素红和ALP染色细胞均呈阳性,成骨细胞特异性基因Osteocalcin表达阳性；成脂诱导后细胞周围有明显的脂滴出现,经0-油红染色呈阳性,且PPARy2表达呈阳性。

参考文献

[1]Sprouty1 Regulates Reversible Quiescence of a Self-Renewing Adult Muscle Stem Cell Pool during Regeneration[J].Kelly L.Shea,Wanyi Xiang,Vincent S.LaPorta,Jonathan D.Licht,Charles Keller,M.Albert Basson,Andrew S.Brack.Cell Stem Cell.2010(2)

[2]Muscle-derived stem cells isolated as non-adherent population give rise to cardiac,skeletal muscle and neural lineages[J].Nikola Arsic,Daria Mamaeva,Ned J.Lamb,Anne Fernandez.Experimental Cell Research.2008(6)

[3]Asymmetric Self-Renewal and Commitment of Satellite Stem Cells in Muscle[J].Shihuan Kuang,Kazuki Kuroda,Fabien Le Grand,Michael A.Rudnicki.Cell.2007(5)

[4]Satellite cells express distinct patterns of myogenic proteins in immature skeletal muscle[J].EdwardSchultz,ConnieChamberlain,Kathleen M.McCormick,Paul E.Mozdziak.Dev.Dyn..2006(12)

[5]吴海青.绵羊骨骼肌卫星细胞的体外培养和诱导分化[D].内蒙古大学,2012.