碳吸附胎牛血清LONSERA的应用

背景^[1-3]

碳吸附胎牛血清LONSERA是一款低水平类固醇类激素的胎牛血清产品。通过碳吸附可降低血清中许多激素及生长因子的浓度，如雌二醇、皮质醇、皮质酮、B类维生素、T3、T4、前列腺素等。该血清适用于上述一些分子可能干扰实验结果的实验中，对于那些需要这些分子的细胞培养，也可能降低细胞生长性能。

胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

牛血清是细胞培养中用量的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

应用^[4][5]

用于17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究

选取因正畸或阻生新鲜拔除的健康、完整、无龋、无隐裂年轻恒牙，在无菌条件下取出牙髓组织，采用组织块酶消化法获取人牙髓细胞并进行原代培养。当细胞生长至铺满孔底80％时进行传代，从而获得大量可供实验用的种子细胞。

取第4代对数生长期人牙髓细胞爬片，用SABC法进行波形蛋白和角蛋白免疫组化染色鉴定细胞来源，倒置显微镜下观察。将处于对数生长期的第4代人牙髓细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后，制成细胞悬液，以104cells/ml分别接种于五个96孔培养板，每板余出一列培养孔不加液，其余各孔每孔液量150μl，培养24h。观察细胞贴壁情况良好后，弃上清液，PBS缓冲液清洗3次，吸干，将细胞随机分为5个实验组、1个对照组和1个空白对照组，每组选6个孔。

实验组：在相应的有细胞孔内加入150μl用含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液配置的终末浓度分别为10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L的17β-雌二醇。

对照组：在相应的有细胞孔内加入150μl含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液培养。

空白对照组：在相应的无细胞孔内加入150μl含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液培养。

连续培养，每天换液以维持药物浓度恒定。MTT比色法检测17β-雌二醇对人牙髓细胞增殖的影响：分别于培养48h和72h时随机取出一个96孔培养板，向所测孔内加入5mg/ml MTT20μl，继续孵育4h，弃孔内液体，每孔加入150μl二甲基亚砜（DMSO），振荡5min，以空白对照孔调零，在酶标仪上测定492nm下各孔的吸光度值。

参考文献

[1]Equol,via Dietary Sources or Intestinal Production,May Ameliorate Estrogen Deficiency-Induced Bone Loss1-3[J].Weaver,Connie M,Legette,LeeCole L.The Journal of Nutrition.2010(7)

[2]Phytoestrogen consumption and association with breast,prostate and colorectal cancer in EPIC Norfolk[J].Heather A.Ward,Gunter G.C.Kuhnle.Archives of Biochemistry and Biophysics.2010(1)

[3]Phytoestrogen Content of Cereals and Cereal-Based Foods Consumed in the UK[J].Gunter G.C.Kuhnle,Caterina Dell’Aquila,Sue M.Aspinall,Shirley A.Runswick,Angela A.Mulligan,Sheila A.Bingham.Nutrition and Cancer.2009(3)

[4]Metabolic activation promotes estrogenic activity of the phytoestrogen-rich plant[J].Wichai Cherdshewasart,Suttijit Sriwatcharakul.Maturitas.2008(2)

[5]程东梅.17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究[D].河北医科大学,2013.