兔抗辣根过氧化物酶抗血清应用

背景^[1-3]

兔抗辣根过氧化物酶抗血清是高纯度HRP经多次免疫健康雄性白兔在其血液制得的免疫血清。过氧化物酶，通常来源于辣根（因此称辣根过氧化物酶），是临床检验试剂中的常用酶。该产品不但广泛用于多个生化检测项目，也广泛运用于免疫类（ELISA）试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。

辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以最常用。HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多个同工酶组成，分子量为40,000，等电点为PH3～9，酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm/OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右（最高可达3.4）。RZ值越小，非酶蛋白就越多。

辣根过氧化酶是指一种蛋白质酶。能分解某些过氧化物的分子，使之成为不能溶解的盐。通过微电极或微电泳技术注入脑中，被轴突和终钮吸收，再通过轴浆的逆流到达单一神经元各组成成分，使其蛋白质氧化。这是20世纪70年代中期发展起来的神经细胞标记方法。可追查注射区的轴突末梢是从哪些脑区来的。注入此酶时，需同时注入一种从小麦胚中提取的物质，防止被轴突吸收。这样可以排除从其他脑区来的过路轴突末梢。对于细胞水平的生理心理学研究，是十分理想的一种有效物质。

应用^[4][5]

用于环境中雌二醇等微量荷尔蒙物质的免疫分析、化学发光分析研究

从半抗原的改造、修饰到完全抗原的制备，免疫动物产生抗体，建立免疫分析方法为主展开工作，对雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、双酚A等环境荷尔蒙进行了分析方法研究，以便为环境荷尔蒙的研究提供更加灵敏、简便、快速的检测手段。

主要内容如下：

1．对雌二醇进行了修饰，引入了连接臂，并与牛血清蛋白结合，合成了完全抗原，测定了抗原中雌二醇与蛋白质的结合比为25：1。利用制备的完全抗原免疫大耳白家兔，制备了抗雌二醇多克隆抗体，ELISA测得抗血清的中点效价为1：25000，抗血清与雌酮的交叉反应率为5％，与雌三醇的交叉反应率为2％，与孕酮的交叉反应率为＜0.1％。抗体的特异性较高。

2．将生物素-亲合素放大系统引入酶免疫分析中，以辣根过氧化物酶标记的亲合素作为探针，邻苯二胺作为辣根过氧化物酶的底物，建立了一种测定雌二醇的电化学酶免疫分析新方法，方法测定雌二醇的线性范围为50.0-500.0 pg．mL-1，检出限为21.0 pg．mL-1。与传统的光度检测的ELISA相比，该方法灵敏度高、检出限低两个数量级。

参考文献

[1]Determination of endocrine-disrupting phenols,acidic pharmaceuticals,and personal-care products in sewage by solid-phase extraction and gas chromatography–mass spectrometry[J].Hing-Biu Lee,Thomas E.Peart,M.Lewina Svoboda.Journal of Chromatography A.2005(1)

[2]Determination of bisphenols in sewage based on supramolecular solid-phase extraction/liquid chromatography/fluorimetry[J].Antonia Moral,María Dolores Sicilia,Soledad Rubio,Dolores Pérez-Bendito.Journal of Chromatography A.2005(1)

[3]Liquid chromatography–tandem mass spectrometry analysis of estrogenic compounds in coastal surface water of the Baltic Sea[J].Iris-Constanze Beck,Regina Bruhn,Juergen Gandrass,Wolfgang Ruck.Journal of Chromatography A.2005(1)

[4]Analyses of phenolic endocrine disrupting chemicals in marine samples by both gas and liquid chromatography–mass spectrometry[J].James D.Stuart,Christopher P.Capulong,Katherine D.Launer,Xuejun Pan.Journal of Chromatography A.2005(1)

[5]王术皓.环境中雌二醇等微量荷尔蒙物质的免疫分析、化学发光分析研究[D].东华大学,2006.