Fmoc-Glu(EDANS)-OH的应用

背景及概述^[1]

Fmoc-Glu(EDANS)-OH是一种化学物质，分子式为C32H31N3O8S，可用于制备用于荧光猝灭的Dabcyl/Edans肽。

相关研究^[1]

Fmoc-Glu(EDANS)-OH制备如下：在室温下，将Fmoc-Glu（OH）-O-叔丁基（1.7g，4mmol），Edans（1.07g，4mmol）和苯并三唑-1-基氧基γ-三（二甲基基）-六氟磷酸（1.77g，4mmol）溶于10mlDMF中，加入二异丙基乙胺（2ml，12mmol，从CaH₂中蒸馏出）。2小时后，反应完成（硅胶薄层色谱，用甲苯/乙酸，9/1，v/v）。向反应混合物中加入50mlCH₂Cl₂和50ml0.5MKHSO₄。将有机层用0.1MKHSO₄和H₂O洗涤，用MgSO₄干燥，并真空蒸发，得到2.8gFmoc-Glu(EDANS)-OH油。为了除去叔丁基，加入10ml冰乙酸和1ml 12 NHCl。搅拌1小时后，真空蒸发溶剂。通过与DMF（2x10ml）共蒸发除去痕量的乙酸。通过在45％tield中的反相HPLC（RP-HPLC）（使用在0.1％TFA的H₂O中的乙腈梯度的C18柱）纯化产物。

应用^[1]

Fmoc-Glu(EDANS)-OH可用于荧光猝灭的Dabcyl/Edans肽的合成：使用tcntagelSAC（负载0.2µueq，粒径90m），在自动化的多合成仪上通过固相化学以10摩尔规模合成底物。在NMP中加入90μl0.67MP*BOP（苯并三唑-1-基-氧基-三-嘧啶---六氟磷酸盐）、20FlNMM（N-甲基吗啉）和Fmoc-Glu（Edans）-OH进行重复偶联，偶联以10倍过量进行3小时。将Dabcyl部分与对-（对-二甲基）氨基氨基苯并偶氮）苯甲酸、10当量PyBOP和20当量NMM的悬浮液偶联3小时。向反应容器中添加200ulTFA/H2O（19/1，v/v）（间隔5分钟6次），从树脂上裂解并去除保护基团。次添加TFA/H20后3小时，加入10ml乙醚/庚烷（1/1，v/v）并冷却至-20C，从合并的滤液中沉淀出肽，然后通过离心分离（200C，2，500g，g，10分钟）。随后，通过Super Pac Pep-S15um9.3x250mm柱的RP-HPLC纯化肽，确立肽的纯度和同一性。

参考文献

[1] NL9700002W METHOD FOR ASSAYING PROTEOLYTIC ENZYMES USING FLUORESCENCE-QUENCHED SUBSTRATES