酪氨酸磷酸化抑制剂AG490的生物活性和药理研究

背景及概述^[1]

酪氨酸磷酸化抑制剂AG490是个人工合成的苯亚甲基的丙二腈的脂类衍生物,类似于酪氨酸和癌基因抑活药,可以和受体酪氨酸激酶竞争结合位置。除了可以阻断Jak2,酪氨酸磷酸化抑制剂AG490还可可以有效地阻断T细胞Jak3,从而阻断Jak/STAT信号传导,引起一系列免疫学效应。

生物活性^[2]

酪氨酸磷酸化抑制剂AG490是一种EGFR抑制剂，IC50为0.1μM，作用于EGFR比作用于ErbB2选择性高135倍，对JAK2也有抑制作用，对Lck，Lyn，Btk，Syk和Src没有抑制活性。酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制EGF依赖的HER14细胞增殖，IC50为3.5μM。与特异性作用于前B细胞急性白血病（ALL）细胞抑制组成型激活的JAK2相一致，5μM酪氨酸磷酸化抑制剂AG490通过诱导程序性细胞死亡，几乎完全抑制所有ALL细胞生长，而对正常造血功能不会造成有害影响。酪氨酸磷酸化抑制剂AG490不会抑制Lck,Lyn,Btk,Syk,和Src激活。

药理研究^[3-4]

报道一、

毛成全等人通过酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对JurkatT细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制JurkatT细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以JurkatT细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对JurkatT细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对JurkatT细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对Jur-katT细胞周期的影响;应用AnnexinV-FITC和PI双染色检测酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对JurkatT细胞凋亡的影响;Westernblot检测酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对JurkatT细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制JurkatT细胞增殖的关系。结果:随着酪氨酸磷酸化抑制剂AG490浓度从1mmol/L增至30mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致JurkatT细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24h最为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;酪氨酸磷酸化抑制剂AG490不能明显抑制JurkatT细胞的活化或促进其凋亡。结论:酪氨酸磷酸化抑制剂AG490能明显抑制JurkatT细胞的生长,其抑制作用可能通过下调JurkatT细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现。

报道二、

刘丽等人观察了酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对慢性粒细胞白血病细胞增殖的抑制作用,以及对增殖相关基因AKT蛋白表达的影响,为CML的治疗,尤其是伊马替尼耐药的CML的治疗提供了理论依据和实验基础。本实验采用不同浓度的AG490分别作用于K562(人红白血病细胞株)、32Dp210(小鼠髓系前体细胞株伊马替尼敏感型)细胞24h、48h、72h,32Dp210-T315I(小鼠髓系前体细胞株伊马替尼耐药型)细胞6h、12h、24h,MTT检测细胞增殖的抑制作用,随后用不同浓度的酪氨酸磷酸化抑制剂AG490作用K562细胞16h,32Dp210细胞和32Dp210-T315I细胞6h,Westernblot检测AKT蛋白及其磷酸化的表达情况,结果显示酪氨酸磷酸化抑制剂AG490能抑制K562、32Dp210及32Dp210-T315I的增殖,其作用是时间依赖和剂量依赖,而且酪氨酸磷酸化抑制剂AG490对伊马替尼耐药细胞32Dp210-T315I的抑制作用更显著。酪氨酸磷酸化抑制剂AG490能抑制AKT蛋白的磷酸化,呈浓度依赖作用,对AKT蛋白表达无明显影响。酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制细胞的增殖可能是由于AG490抑制AKT蛋白的磷酸化进而影响细胞增殖。

参考文献

[1][学位论文]王彬2003-西安交通大学:外科学

[2]AG490PromotesHIF-1αAccumulationbyInhibitingItsHydroxylation.Fernandez-Sanchezetal.CurrMedChem.2012Aug1;19(23):4014-23

[3]毛成全,邢飞跃,郭中峰,方志远.酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制JurkatT细胞增殖[J].细胞与分子免疫学杂志,2010,26(03):214-217.

[4]刘丽.AG490对慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响及其机理研究[D].吉林大学,2010.