人中性粒细胞分离液试剂盒的应用

背景^[1-3]

人中性粒细胞分离液试剂盒为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是Ficoll 400与泛影酸葡甲胺。适用于从人或各种动物血液或脏器组织中分离中性粒细胞，在医疗和医学生物学研究中广泛应用。

操作步骤

A．取1ml新鲜抗凝血与E液1：1混合再与1ml的全血及组织稀释液混匀置20℃-30℃下自然沉降20-30分钟。吸取浑浊的上清部分，底部红细胞（含大量中性粒细胞）备用；

B．将步骤A中所得的浑浊上清液体小心叠加在A液之液面上（上清液与A液的比例为1：1）；

C．以400g（约1500转/分）离心15分钟（半径15cm水平转子）；

此时离心管中由上至下细胞分四层。*层;为稀释液（血浆）层。第二层；为环状

乳白色单个核细胞层。第三层；为混浊分离液层（此层液体中含有一定量中性粒细胞）。

第四层；极少量红细胞层（含一定量中性粒细胞）。

D．将步骤A及步骤C中所得红细胞层用红细胞裂解液裂解并去除红细胞获得大量中性粒细胞

E.收集步骤C中所得第三层混浊分离液及步骤D中所得大量中性粒细胞放入含细胞洗涤液

4-5ml的试管中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心20分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需中性粒细胞。

应用^[4][5]

用于中性粒细胞在胃癌中的分布、调控及免疫抑制功能的初步研究

中性粒细胞在宿主抗感染免疫中发挥着重要作用。当局部组织发生感染时，中性粒细胞渗出血管，到达感染部位，吞噬并杀死入侵的病原微生物，同时引起组织损伤和炎症反应。临床证据和试验结果均提示，中性粒细胞数量的增加与肿瘤预后密切相关，中性粒细胞在肿瘤中的作用也引起了越来越多的关注。在肿瘤微环境中存在着N1型(抑瘤)和N2型(促瘤)两种肿瘤相关中性粒细胞。这两种肿瘤相关中性粒细胞在调控诱导、表型功能等方面存在明显差异。

N1型肿瘤相关中性粒细胞与抗感染免疫中的中性粒细胞在表型和功能上都很相似。这种表型的中性粒细胞，其与免疫激活相关的细胞因子及趋化因子表达增加，而与免疫抑制相关的分子如精氨酸酶则表达降低，因此，也就具有了更强的肿瘤杀伤作用。N2型肿瘤相关中性粒细胞则通过分泌血管生成因子和基质降解酶类来抑制机体的抗肿瘤免疫反应，进而发挥促进肿瘤生长的效应。

胃癌是全球发生率第四、死亡率第二的恶性肿瘤，预后很差。肿瘤微环境中浸润的免疫细胞的类型、数量以及浸润部位与多种肿瘤，包括胃癌的预后密切相关，而在多种肿瘤中均发现了中性粒细胞的浸润，肿瘤相关中性粒细胞的作用也慢慢得到了越来越多的重视。

参考文献

[1]On the dual roles and polarized phenotypes of neutrophils in tumor development and progression[J].H.Piccard,R.J.Muschel,G.Opdenakker.Critical Reviews in Oncology/Hematology.2011(3)

[2]The role of CXC chemokines in the transition of chronic inflammation to esophageal and gastric cancer[J].Verbeke Hannelien,Geboes Karel,Van Damme Jo,Struyf Sofie.BBA-Reviews on Cancer.2011(1)

[3]Chemokines and chemokine receptors:new insights into cancer-related inflammation[J].Gwendal Lazennec,Ann Richmond.Trends in Molecular Medicine.2010(3)

[4]Isotypic neutralizing antibodies against mouse GCP-2/CXCL6 inhibit melanoma growth and metastasis[J].Hannelien Verbeke,Sofie Struyf,Nele Berghmans,Els Van Coillie,Ghislain Opdenakker,Catherine Uyttenhove,Jacques Van Snick,Jo Van Damme.Cancer Letters.2010(1)

[5]王婷婷.中性粒细胞在胃癌中的分布、调控及免疫抑制功能的初步研究[D].第三军医大学,2014.