小鼠外周血单核细胞分离液试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠外周血单核细胞分离液试剂盒用于分离小鼠外周血单核细胞。分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。

单核细胞（monocytes）是血液中的血细胞，也是体积的白细胞，是机体防御系统的一个重要组成部分。单核细胞来源于骨髓中的造血干细胞，并在骨髓中发育，当它们从骨髓进入血液时仍然是尚未成熟的细胞。目前认为它是巨噬细胞和树突状细胞的前身，具有明显的变形运动，能吞噬、清除受伤、衰老的细胞及其碎片。

操作方法（操作全过程应在20-25度环境下进行）

1在10ml或15ml玻璃离心管中依次小心加入A、D 2种液体各2ml,制成梯度界面（各液面分层一定清晰）。

2取1ml肝素抗凝血与全血及组织匀浆稀释液（或胎牛血清或人血清悬起匀浆的细胞1X107/ml）1：1混合后于D液上重叠，以1000-1500rpm/min离心40min，在血浆与D液的界面为单核细胞层.（提取率约为80%）。

3吸出单核细胞层以细胞洗涤液洗涤三次备用。

细胞放入含细胞洗涤液4-5毫升的试管中，充分混匀后，以1500-2000转/分离心10-30分钟。沉淀经反复洗2次即得所需细胞。

应用^[4][5]

用于高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血、骨髓单核细胞及骨髓造血干细胞的变化特点及机制研究

脂肪组织的巨噬细胞是促炎因子TNF-α的主要来源,在3T3-L1脂肪细胞中用TNF-α处理后可以干扰胰岛素信号通路,出现胰岛素抵抗。相反,敲除TNF-α或其受体TNF-受体1的小鼠高脂诱导下不易出现胰岛素抵抗。随后证实,脂肪组织来源的细胞因子包括IL-6,IL-β和趋化因子CCL-2在肥胖时表达均增多,即脂肪组织的巨噬细胞连接着肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病的重要枢纽。

除此之外,在临床上发现,肥胖和2型糖尿病患者的血中单核细胞增多,单核细胞的变化与动脉粥样硬化、冠心病及脑卒中的发生、预后关系密切,在动物模型中,也发现ob/ob的小鼠高脂诱导后循环中的单核细胞增多,可能与骨髓造血干细胞功能增加由关。高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血和骨髓中单核细胞的变化特点目的肥胖导致的脂肪组织,特别是腹部网膜组织巨噬细胞浸润,是胰岛素抵抗和2型糖尿病发病的关键环节,而关于巨噬细胞的活化和来源,目前机制不明。正常情况下,外周血的单核细胞进入组织中后可以分化为巨噬细胞,有报道称肥胖和2型糖尿病时,血中的单核细胞增加,但在有诱发因素(高脂、高糖、运动量减少、饮酒等)出现到机体变成肥胖这个动态变化过程中,单核细胞的变化特点。

参考文献

[1]Protection from obesity-induced insulin resistance in mice lacking TNF-alpha function.Uysal KT,Wlesbrock SM,Marino MW,et al.Nature.1997

[2]Obesity,Inflammation,and Cardiovascular Risk.P.Mathieu,I.Lemieux,J-P Despres.Clinical Pharmacokinetics.2010

[3]Cause-specific excess deaths associated with underweight,overweight,and obesity.Flegal Katherine M,Graubard Barry I,Williamson David F,Gail Mitchell H.JAMA:the journal of the American Medical Association.2007

[4]Variations in circulating inflammatory factors are related to changes in calorie and carbohydrate intakes early in the course of surgery-induced weight reduction.Elise Dalmas,Christine Rouault,Meriem Abdennour.The American Journal of Clinical Nutrition.2011

[5]刘艳霞.高脂饮食诱导下C57BL/6J小鼠外周血、骨髓单核细胞及骨髓造血干细胞的变化特点及机制研究[D].郑州大学,2018.