人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒
发布日期:2020/5/15 10:08:20
人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒
人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒背景[1]
ASK-1属于促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)家族中的一员,其为广泛存在于真核细胞中的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中的关键酶之一,通过磷酸化激活MKK3/MKK6-p38和MKK4/MKK7-c-JunNH2-terminalkinase(JNK)途径,导致细胞凋亡。ASK-1在多种细胞应答中起关键作用,包括细胞凋亡、增殖和免疫反应。
实验原理[1]
人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。已知ASK-1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ASK-1物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ASK-1的活性浓度呈比例关系。
试剂盒操作步骤
操作流程[1]
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50uL;
3.样本孔中加入待测样本50uL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100uL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350uL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50uL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
主要参考文献
[1] 张剑飞;汤晓飞;葛丽华;杨晶;牛文雯;张敏;陈彤;细胞凋亡信号调节酶1在口腔白斑细胞凋亡中的作用。《北京口腔医学》
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