苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)ELISA KIT采用双抗体夹心ELISA法检测样本中的苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)。用苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，抗原浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。

苏云金芽孢杆菌，英文名称：Bacillus thuringiensis，简称Bt，是一种产晶体蛋白的好气性蜡状芽孢杆菌。苏云金杆菌（B．t）制剂是胃毒剂，进入昆虫消化道后，伴孢晶体（主要成分为蛋白质）被昆虫碱性肠液破坏成较小单位的δ-内毒素，使中肠停止蠕动、瘫痪，中肠上皮细胞解离、停食，芽孢则在肠中萌发，经被破坏的肠壁进入血腔，大量繁殖，使害虫得败血症而死，死亡幼虫身体瘫软，呈黑色。目前已知苏云金杆菌有30多个变种，某些变种营养体对数生长时期产生β-外毒素，耐热，是一种腺嘌呤核苷酸，也起杀虫作用。苏云金杆菌（B．t）及其混配制剂已用于防治蔬菜、水稻、玉米、棉、果树、茶树和林区等害虫。如防治菜青虫、小菜蛾、稻苞虫、稻纵卷叶螟、玉米螟、棉铃虫、枣尽蠖、松毛虫、烟青虫、茶卷蛾、茶尺蠖等百种虫害，是应用最广的微生物杀虫剂。

应用^[4][5]

用于Bt水稻外源基因及其表达蛋白的环境持留研究

Bt抗虫水稻的外源基因及其表达产物可能是一类潜在的环境外源污染物,有关这类生物大分子在农业生态系统中的环境行为等方面的研究已成为国内外新的研究热点,具有重要的科学和现实意义。目前关于Bt抗虫水稻的研究主要集中在表达Cry1Ab蛋白的Bt抗虫水稻(如克螟稻)上,而这类Bt抗虫水稻大多含有标记基因(hpt,npt11),对于从环境安全性角度考虑而育成的没有标记基因的Bt水稻的相关研究较少。本文以Bt抗虫水稻(华池B6、TT51)与其亲本(嘉早935、明恢63)及亲缘较远但农艺性状相近的水稻品种(中九B、R9311)为试材,通过实验室和田间试验,主要采用ELISA检测和同位素标记等方法研究了(1)Bt抗虫水稻植株中Bt蛋白含量的时空表达及其在根际土中的持留规律；(2)转基因水稻秸秆还土后外源蛋白的持留规律；(3)Bt抗虫水稻TT51秸秆还土对土壤中可培养微生物的影响；(4)Bt基因在土壤中的降解动态及向土壤微生物水平转移的可能性初探。

参考文献

[1]Effects of repeated cultivation of transgenic Bt cotton on functional bacterial populations in rhizosphere soil[J].Hai-Yan Hu,Xiao-Xia Liu,Zhang-Wu Zhao,Jian-Guang Sun,Qing-Wen Zhang,Xing-Zhong Liu,Yong Yu.World Journal of Microbiology and Biotechnology.2009(3)

[2]Sensitive detection of transgenic plant marker gene persistence in soil microcosms[J].F.WIDMER,R.J.SEIDLER,L.S.WATRUD.Molecular Ecology.2008(5)

[3]Genetically Modified Rice,Yields,and Pesticides:Assessing Farm‐Level Productivity Effects in China[J].Jikun Huang,Ruifa Hu,Scott Rozelle,Carl Pray.Economic Development and Cultural Change.2008(2)

[4]Natural Tolerance to Imazethapyr in Red Rice(Oryza sativa)[J].Yong I.Kuk,Nilda R.Burgos,Vinod K.Shivrain.Weed Science.2008(1)

[5]张燕飞.Bt水稻外源基因及其表达蛋白的环境持留研究[D].浙江大学,2011.