人5羟基吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人5羟基吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA KIT采用双抗体夹心法测定标本中人5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)水平。用纯化的人5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)，再与HRP标记的5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)浓度。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于人尿液中5-羟吲哚乙酸及人血浆中吉非替尼的检测方法研究

5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)是单胺类中枢神经递质的一种,是5-羟色胺(5-HT)生成的无活性的酸性代谢终产物,最终从尿液中排出。5-HIAA是人体内重要的神经递质代谢产物,增高或降低都会间接反映体内某些病理改变。在转移性类癌患者尿液中5-HIAA的水平明显升高。临床上将5-HIAA的过度分泌作为类癌瘤的最为特异性的生化指征。检测24小时尿液中5-HIAA的含量可用于类癌综合征病情的监测及治疗疗效的评估。

类癌归属于神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasms,NENs),NENs是一类起源于干细胞且具有神经内分泌标记物、能够产生生物活性胺或多肽激酶的肿瘤。其中,胃肠胰神经内分泌肿瘤(gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasms,GEP-NENs)最为多见。在治疗胃肠胰神经内分泌肿瘤的药物研究中,一些新药例如:吉非替尼以及沙利度胺等发挥了一定的效果。

参考文献

[1]An unusual cause of hypoxia:getting to the heart of the matter[J].Daniel Hammersley,Aamir Shamsi,Mohammad Murtaza Zaman,Philip Berry,Lydia Sturridge.Echo Research and Practice.2018(1)

[2]Determination of endogenous inflammation-related lipid mediators in ischemic stroke rats using background subtracting calibration curves by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Yang Yang,Qisheng Zhong,Canlong Mo,Hao Zhang,Ting Zhou,Wen Tan.Analytical and Bioanalytical Chemistry.2017(28)

[3]Combination osimertinib and gefitinib in C797S and T790M EGFR mutated non-small-cell lung cancer[J].Surein Arulananda,Hongdo Do,Ashan Musafer,Paul Mitchell,Alexander Dobrovic,Thomas John.Journal of Thoracic Oncology.2017

[4]A surrogate analyte-based Liquid Chromatography-Tandem Mass spectrometry method for THE determination of endogenous cyclic nucleotides in rat brain[J].Jie Chen,Ali Tabatabaei,Doug Zook,Yan Wang,Anne Danks,Kathe Stauber.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.2017

[5]李熙拓.人尿液中5-羟吲哚乙酸及人血浆中吉非替尼的检测方法研究[D].上海交通大学,2018.