人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)水平。用纯化的二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)，再与HRP标记的二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)抗原结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)浓度。

操作步骤

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于5-FU代谢相关酶检测及临床意义研究

探讨结直肠癌患者5-FU代谢相关酶表达水平与5-FU疗效、毒性反应及其与临床病理的相关性。方法对58例结直肠癌患者,术前取血应用高效液相色谱法(HPLC)测定血内源性二氢尿嘧啶(UH2)/尿嘧啶(U)值代表血DPD活性;采用免疫组织化学方法检测癌组织和正常结直肠粘膜组织中的TP、TS表达。评价患者血DPD活性与5-FU化疗毒性及TP、TS表达情况与5-FU化疗疗效、临床病理因素之间的相关性。结果1结直肠癌组织的TP表达水平明显高于正常粘膜组织,差别有统计学意义(P<0.05);进一步分层分析表明低组织分化者TP阳性率高于中高分化者;Dukes分期越晚、以及有淋巴结转移者TP表达阳性率越高;淋巴结转移组TP表达率明显高于无淋巴结转移组。治疗相关分析显示TP(+)者具有一定的生存优势,肿瘤进展时间(TTP)显著长于TP(-)者〔P<0.05〕。

参考文献

[1]Thymidine Phosphorylase and Dihydropyrimidine Dehydrogenase Expression Levels in Tumor and Normal Tissue Specimens of T3 Human Colorectal Carcinoma[J].Atsushi Okita,Kazunori Tsukuda,Masakazu Murakami,Tetsuya Ota,Hiroyoshi Doihara,Manabu Suda,Tomoharu Nakano,Kinya Matsuoka,Eiji Suzuki,Minoru Naito,Akio Andou,Nobuyoshi Shimizu.Surgery Today.2006(4)

[2]Influence of chemotherapeutic agents and cytokines on the expression of 5-fluorouracil-associated enzymes in human colon cancer cell lines[J].Kaori Miyazaki,Takeshi Shibahara,Daisuke Sato,Kazuhiko Uchida,Hideo Suzuki,Hirofumi Matsui,Akinori Yanaka,Akira Nakahara,Yasushi Matsuzaki.Journal of Gastroenterology.2006(2)

[3]Thymidine phosphorylase,dihydropyrimidine dehydrogenase and thymidylate synthase mRNA expression in primary colorectal tumors—correlation to tumor histopathology and clinical follow-up[J].International Journal of Colorectal Disease.2006(3)

[4]Thymidine phosphorylase and dihydropyrimidine dehydrogenase activity in colorectal carcinoma and patients prognosis[J].Masahide Ikeguchi,Masato Makino,Nobuaki Kaibara.Langenbeck’s Archives of Surgery.2002(5-6)

[5]邢洪存.5-FU代谢相关酶检测及临床意义[D].吉林大学,2006.