人解脲脲原体抗体(UU-AB)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人解脲脲原体抗体(UU-AB)ELISA KIT是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附（ELISA）检测样本中人解脲脲原体抗体(UU-AB)含量的快速检测试剂盒。

往预先包被人解脲脲原体抗体(UU-Ab)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人解脲脲原体抗体(UU-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

解脲脲原体（M.urealyticum），亦称溶脲脲原体，是六种脲原体属中的一种，与人类泌尿生殖道感染有密切关系。能利用自身的尿素酶，分解尿素后以提供代谢的能源。在分类上属支原体科脲原体属。解脲脲原体是人类泌尿生殖道常见的寄生菌之一，在特定环境下可致病。在人体的定植可有二次上升趋势，即分娩时由母体产道感染新生儿，以后迅速减少；从性生活开始又渐增多。近年来，解脲脲原体所致泌尿生殖道感染日益受到重视，是引起非淋菌性尿道炎的病原体之一。现已被列为性传播疾病的病原体。

应用^[4][5]

用于脲原体感染与非淋菌性尿道炎的Meta分析及PCR-ELISA检测法的初步建立

脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)、微小脲原体(Ureaplasma parvum,Up)感染与男性非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis,NGU)的相关性,通过系统性回顾分析,揭示在男性非淋菌性尿道炎中Uu,Up感染对疾病的作用,为鉴别检测Uu和Up提供依据。通过将传统的PCR检测方法与微孔板核酸杂交以及酶显色技术相结合,建立起用于Uu,Up检测和鉴别的PCR-ELISA方法,并对该方法进行初步的临床应用性评价。

方法采用Meta分析的方法应用Review Manager5.0软件进行综合定量评价,计算其优势比(OR)等。应用生物素标记的U4,U5引物进行PCR扩增,利用Primer在线软件反向查出Uu,Up扩增出的核酸序列并根据NCBI在线Blast软件设计出Uu,Up特异性捕获探针,将捕获探针包被到DNA-BINDTM微孔板上并与PCR产物进行杂交,引入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素检测系统进行显色,从而初步构建出PCR-ELISA检测方法。通过对生殖支原体G37、β-溶血性链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等参考菌和Uu代表菌株血清型8,Up代表菌株血清型3进行PCR-ELISA方法检测以验证该方法的特异性。

参考文献

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[3]A rapid method for the detection of representative coliforms in water samples:polymerase chain reaction-enzyme-linked immunosorbent assay(PCR-ELISA)[J].Jong-Tar Kuo,Chiu-Yu Cheng,Hsiao-Han Huang,Chia-Fen Tsao,Ying-Chien Chung.Journal of Industrial Microbiology&Biotechnolog.2010(3)

[4]The Clinical Significance of Ureaplasma urealyticum in Chronic prostatitis[J].Radoni?,Kova?evi?,Markoti?,?kerk,Tur?i?,?kerk.Journal of Chemotherapy.2009(4)

[5]张楠.脲原体感染与非淋菌性尿道炎的Meta分析及PCR-ELISA检测法的初步建立[D].天津医科大学,2013.