甘油-亚甲蓝染色液的应用

背景^[1-3]

甘油-亚甲蓝染色液由甘油、亚甲蓝、去离子水组成，可用于检查粪便的各种蠕虫卵。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。亚甲蓝，化学名称为3,7-双（二甲氨基）吩噻嗪-5-翁氯化物，又称亚甲基蓝、次甲基蓝、次甲蓝、美蓝、品蓝，是一种芳香杂环化合物。被用作化学指示剂、染料、生物染色剂和药物使用。亚甲蓝的水溶液在氧化性环境中蓝色，但遇锌、氨水等还原剂会被还原成无色状态。亚甲蓝高浓度时直接使血红蛋白氧化为高铁血红蛋白。低浓度时，在还原型辅酶I脱氢酶（NADPH）作用下，还原成为还原型亚甲蓝，能将高铁还原型蛋白还原为血红蛋白。临床上还试用于治疗尿路结石、闭塞性脉管炎、神经性皮炎。

【操作步骤】

1、准备玻璃纸条：将玻璃纸浸润于甘油-亚甲蓝染色液。

2、置少量粪便样本于报纸或小纸片上，用滤网在粪便标本上加压。

3、用刮片横刮滤网以收集筛过的粪便样本。

4、取带孔平板置于载玻片中央位置，用刮片时孔内填满粪便样本。

5、小心取下平板，使粪便样本呈矮小圆柱状留在玻片上。

6、玻璃纸条浸泡于甘油-亚甲蓝染色液，取出并覆盖于粪便上。

7、翻转玻片，在另一张玻片或在表面平滑、坚硬的物体上，朝向玻璃纸条挤压粪便样本，以使标本在玻片与玻璃纸条间均匀散开。

8、轻轻从侧面滑动并移下上层玻片，避免与玻璃纸条分离或使之掀起，将玻片置于实验台上，玻璃纸条面朝上。

应用^[4][5]

用于牛粪便虫卵检查法的初步智能化研

反刍家畜寄生虫病是一种普遍存在且危害较大的疾病,目前通常采取粪便虫卵检查法对其进行诊断和普查。该方法虽然是家畜寄生虫病的经典诊断方法,但其准确性较差、效率低,而且对检验人员的依赖性较强。为此,我们尝试开发一种以粪便虫卵检查法为基础,并与计算机软件相结合的智能化诊断方法,即借助不变矩对虫卵进行数字化描述和自动化识别,充分发挥计算机软件准确、快捷的优点,实现虫卵检查法的智能化。首先,在内蒙古镶黄旗地区进行牛胃肠道寄生虫流行病学调查,在此基础上,广泛收集牛胃肠道的各种蠕虫卵图像。同时,利用显微解剖技术剖解实验室已鉴定虫体的泄殖腔,制作涂片,光学显微镜下观察和拍照,从而初步建立部分牛蠕虫卵原始图像库。然后,运用雅可比(p=4,q=3)-傅立叶矩(PJFM’s)对虫卵图像进行特征提取,建立不变矩数据库,并开展虫卵图像的重建试验。最后,尝试用Matlab的图形用户接口(GUI)工具,实现虫卵识别与计数系统人机对话界面。

结果显示,内蒙古镶黄旗地区牛胃肠道寄生虫总感染率为44.92%,共检查出9种蠕虫卵,分别隶属于3门3纲3目5科及9属。建立了9种蠕虫卵的原始图像库,共1147幅虫卵图片。并建立了虫卵的部分不变矩数据库,经特征提取后发现,不同虫卵的不变矩值有明显差别,而相同虫卵的不变矩值接近相同。图像重建试验效果较好。初步实现了虫卵识别与计数系统人机对话界面,且各个模块衔接正常,运行畅通。因此,PJFM’s可以用作虫卵显微特征图像识别的特征选择与提取量,并可为寄生虫卵的智能化识别和鉴定提供依据。

参考文献

[1]Parasitic infections in dairy cattle around Hanoi,northern Vietnam[J].T.Geurden,R.Somers,N.T.G.Thanh,L.V.Vien,V.T.Nga,H.H.Giang,P.Dorny,H.K.Giao,J.Vercruysse.Veterinary Parasitology.2008(3)

[2]Biological shape characterization for automatic image recognition and diagnosis of protozoan parasites of the genus Eimeria[J].Pattern Recognition.2007(7)

[3]A Sampling of Factors Relative to the Epidemiology of Gastrointestinal Nematode Parasites of Cattle in the United States[J].Thomas A.Yazwinski,Chris A.Tucker.Veterinary Clinics of North America:Food Animal Practice.2006(3)

[4]ON IMAGE ANALYSIS BY THE METHODS OF MOMENTS.Teh,Cho-Huak,Chin,Roland T.IEEE Transactions on Pattern Analysis and Machine Intelligence.1988

[5]陈少博.牛粪便虫卵检查法的初步智能化研[D].内蒙古农业大学,2013.