淀粉样物质染色液(PUCHTLER碱性刚果红法)的应用

背景^[1-3]

淀粉样物质染色液(PUCHTLER碱性刚果红法)主要由刚果红染色液、苏木素染色液等组成。其染色原理在于淀粉样物质对刚果红比其他的组织结构具有更大的亲和力，其羟基与刚果红的氨基结合，从而使淀粉样物质染成红色。

淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官，导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β折叠层结构。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。淀粉样物质（amyloid)的化学性质并非淀粉，而是一类具有某些共同染色特性和形态特征的蛋白质，迄今已证实淀粉样蛋白至少有10种之多。

有两种主要的淀粉样蛋白：①淀粉样轻链蛋白（amyloid light chain derived protein,AL型蛋白）为免疫球蛋白的轻链和（或）其N端片段，有人认为它们是浆细胞的产物；②淀粉样物质相关蛋白（amyloid-associated protein,AA型蛋白）是肝脏产生的一种血清蛋白（称为^血清淀粉样物质相关蛋白，serum amyloid-associated protein，SAA)的不溶性分解产物。此外还有其他一些化学性质不同但都具有卩折片构型的蛋白类物质，也因其形态相似而归入淀粉样物质之类，如甲状腺髓样癌中来自降钙素前身（pmcalcitonin)的淀粉样物质，老年性心肌淀粉样变的血浆前清蛋白（即甲状腺素运载蛋白transthyretin)、Alzheimer病脑组织内老年斑核心部分的ft淀粉样蛋白等。

应用^[4][5]

用于转甲状腺素蛋白基因多态性与家族性淀粉样变性周围神经病的临床、病理研究

家族性淀粉样变性周围神经病是一种常染色体显性遗传病，本病是以各脏器淀粉样沉积为特点。周围神经病、自主神经功能紊乱、玻璃体混浊、心肌病和肾功能衰竭是FAP的主要临床表现。TTR是一种四聚体血清蛋白，每个单体由14，000个碱基组成，主要在肝脏和脑脉络丛组织中产生。FAP家系分布遍布世界各地。到目前为止，已报道的TTR基因碱基突变位点已超过100种，包括没有被病理证实的临床病例在内。其中Val30Met（TTRMet30）在FAP中是最普遍的类型。基因突变位点的不同导致淀粉样纤维沉积部位不同从而表现出不同的临床症状。

标本分成两部分。一部分以10%甲醛溶液固定后石蜡包埋和切片，片厚5μm，常规苏木精-伊红（HE）和刚果红染色并应用偏振光显微镜进行镜下观察。另一部分以3%戊二醛固定，1%锇酸后固定，常规脱水和EPON812包埋；半薄切片，甲苯胺蓝染色，光镜观察。该家系先证者的脾脏改变轻微。刚果红染色仅见小动脉血管壁内有少量淀粉样物质沉积，而且抗TTR抗体反应不明显。在中枢神经系统中，脑实质及脊髓内均无淀粉样物质沉积。基因测序可知，异常TTR为基因点突变所致，突变位置为第二个外显子第30个密码子T由C取代，从而导致TTRVal30Ala突变。

参考文献

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[2]Gelsolin Amyloidosis as a Cause of Early Aging and Progressive Bilateral Facial Paralysis[J].Tiia Pihlamaa,Jorma Rautio,Sari Kiuru-Enari,Sinikka Suominen.Plastic and Reconstructive Surgery.2011(6)

[3]Progression of transthyretin amyloid neuropathy after liver transplantation[J].Juris J.Liepnieks,Lucy Q.Zhang,Merrill D.Benson.Neurology.2010(4)

[4]Heart complications in familial transthyretin amyloidosis:impact of age and gender[J].Rolf Hö,rnsten,Johanna Pennlert,Urban Wiklund,Per Lindqvist,Steen M.Jensen,Ole B.Suhr.Amyloid.2010(2)

[5]刘晶瑶.转甲状腺素蛋白基因多态性与家族性淀粉样变性周围神经病的临床、病理研究[D].吉林大学,2013.