天青石蓝苏木素染色液的应用

背景^[1-3]

天青石蓝苏木素染色液采用天青石蓝B和明矾苏木素联合使用，其优势在于天青石蓝B能抗酸，且高铁盐可加强明矾苏木素与细胞核的结合力，使细胞核染色更深，因此可以达到抗酸的目的，使苏木素的颜色不易褪去。苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。单纯的明矾苏木素细胞核染色的主要缺点是对随后应用的任何酸性染料比较敏感，最常见于Van Gieson染色和masson三色染色。Van Gieson染色时使用的酸可脱掉大部分苏木素的颜色，以致细胞核几乎看不到，在这种情况下使用铁苏木素或天青石蓝可抵抗酸的影响而达到满意效果。单纯的明矾苏木素细胞核染色后的缺点是对随后应用的任何酸性染料比较敏感，最常见于Van Gieson染色和masson三色染色。Van Gieson染色时使用苦味酸品红可脱掉大部分苏木素的颜色，以致细胞核几乎看不到，在这种情况下使用铁苏木素或天青石蓝可抵抗苦味酸的影响而达到满意效果。目前，可靠的方法是天青石蓝和明矾苏木素联合使用，其优势在于天青石蓝能抗酸，天青石蓝溶液中的高铁盐可加强明矾苏木素与细胞核的结合力，使细胞核染色更深，因此可以达到抗酸的目的。

操作步骤：

石蜡切片脱蜡，梯度乙醇水化至水。

入天青石蓝B染色液，浸染5min。

蒸馏水冲洗。

入Mayer苏木素染色液，浸染5min。

切片水洗蓝化。

按要求继续进行下游实验。

应用^[4][5]

用于雷米普利对大鼠非梗塞区心肌胶原及细胞凋亡的影响

心肌梗塞后可发生一系列神经内分泌反应,包括交感神经、肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）以及一系列内分泌激素的释放。近年的研究认为,这些神经内分泌反应可能与梗塞区心肌细胞肥厚、成纤维细胞增生、胶原沉积及细胞凋亡的过程密切相关。严重缺氧导致细胞坏死,而轻度缺氧可促进细胞凋亡。由于心脏间质纤维化导致毛细血管的密度低,而氧的弥散距离和心肌乳酸脱氢酶的活性相应增加,因而,在心脏间质中胶原蛋白所包围的心肌细胞处于缺氧状态,这就意味着心肌细胞凋亡可能伴随着间质纤维化而存在于心肌梗塞的早期和晚期。

由于心梗后心脏不同部位、不同阶段发生重构的刺激因素和变化情况可能有所不同,而不同的肾素血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）对心肌组织的亲和力也可能不同,雷米普利是一种长效高组织亲和力的ACEI,故本实验重点研究梗塞后不同阶段非梗塞区心肌间质胶原及细胞凋亡的变化情况及应用雷米普利干预的结果。心肌胶原容积密度分数（CVF）测定（Messon三色法）:切片脱蜡后蒸馏水洗。3%重铬酸钾过夜,天青石兰B染10分钟,苏木精液染10分钟,1%盐酸酒精分化,细胞核变蓝。酸性复红。丽春红G。橙黄G稀释液染10分钟。滤纸轻吸。5%磷钨酸分化20分钟。亮绿染色15分钟,迅速通过95%酒精。脱水、封片如常。半定量分析:每张Messon染色切片在放大400倍下从非梗塞区获取切片图象,随机选取4个视野,通过测量选定区域染色组织的面积,将测量的面积与观察下的整个面积的比例来作为每个视野中胶原组织占百分比。

参考文献

[1]Effects of collagen density on cardiac fibroblast behavior and gene expression[J].Melissa JoyLoftis,DaciaSexton,WayneCarver.J.Cell.Physiol..2003(3)

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[3]Synergistic enhancement of collagenous protein synthesis by human gingival fibroblasts exposed to nifedipine and TNF‐alpha in?vitro[J].Roger B.Johnson.Journal of Oral Pathology&Medicine.2003(7)

[4]Beneficial effects of angiotensin-converting enzyme inhibitor and nitrate association on left ventricular remodeling in patients with large acute myocardial infarction:the delapril remodeling after acute myocardial infarction(DRAMI)trial[J].Roberto Latini,Lidia Staszewsky,Aldo P Maggioni,Paolo Marino,Francisco Hernandez-Bernal,Gianni Tognoni,Violeta Labarta,Silvana Gramenzi,Federico Bianchi,Giuseppe Sarcina,Giovanni Cremonesi,Gian Luigi Nicolosi,Enrico Geraci.American Heart Journal.2003(1)

[5]贾志梅.雷米普利对大鼠非梗塞区心肌胶原及细胞凋亡的影响[D].中国医科大学,2006.