芽孢晶体染色液的使用方法

背景及概述^[1]

细菌是否有芽孢以及芽孢的形状和位置都是细菌的重要特征，细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁结构复杂、致密、通透性低，着色和脱色都比营养细胞困难。芽孢有很强的抗热和抗化学物质的特性，当采用碱性染料并加热或延长染色时间时，使菌体和芽孢都能着色，再用蒸馏水冲洗脱去菌体颜色，但芽孢的颜色仍然可以保留，可以在显微镜下明显区分芽孢和营养体的形态。

芽孢晶体染色液主要由石炭酸、乙醇、品红等组成，芽孢晶体会被染成红色，菌体呈红色，可以判断某些芽孢杆菌产生碱溶性蛋白晶体(伴孢晶体)。但应注意，观察芽孢应在成熟期，但也不能过久，否则只能看到芽孢，而营养体已经消失。芽孢晶体染色液仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。

操作步骤^[1]

1、在洁净无油脂的载玻片上滴蒸馏水，用接种环挑取少许巨大芽孢杆菌斜面的菌体，不蒸馏水混合。

2、制成涂片，自然干燥。

3、在涂液处滴加芽孢晶体染色液，使细菌分布均匀，染色。

4、用水轻轻冲洗。

5、镜检：干燥后镜检，观察芽孢的形状、大小，在菌体中的位置以及是否使菌体胀大。

染色结果^[1]

伴孢晶体：红色

菌体：蓝色

附注：镜检应注意观察：

形态：圆形或卵圆形

位置：中央，末端，次末端

大小：菌体细胞是否膨大

注意事项^[1]

1、玻片应洁净，无油污。

2、芽孢形成于生长发育期，观察芽孢应在成熟期，但也不能过久，否则只能看到芽孢，而营养体已经消失。

3、染色过程应小心操作，防止菌脱落。

4、固定时不宜用高热火焰固定。

主要参考资料

[1] 芽孢晶体染色液说明书