Masson-Fontana 黑色素染色液的使用方法

背景及概述^[1]

黑色素属于非血源性内生色素，是一组由黑色素母细胞产生的颜色从浅棕色到黑色的色素。这种色素通常出现在皮肤表皮、眼睛、大脑的黑质和毛囊中。黑色素有一个显著的物理性质，即完全不溶解于大多数有机溶剂——几乎可以肯定是由于黑素体中已形成的黑色素可与蛋白质紧密结合。黑色素另一个物理性质是能够被强氧化剂漂白，尽管这个过程是缓慢的。在病理情况下，这种色素也可出现在良性痣细胞瘤中和恶性黑色素瘤中。在常规 HE 染色中不呈黑色而是呈棕黄色或棕黑色。许多方法可用于识别黑色素和黑色素生成细胞，如还原方法，如 Masson-Fontana 银技术和 Schmorl 三价铁-铁氰化K还原实验；酶方法(如多巴反应)；荧光方法；免疫组织化学。

Masson-Fontana 黑色素染色液利用黑色素具有将银氨溶液还原为金属银特性即嗜银反应原理来显示黑色素，染色后黑色素呈黑色，该法属于常用的黑色素特殊染色法，效果较其他染色理想。

组成^[1]

Masson-Fontana 黑色素染色液由三部分组成：试剂(A)Fontana 氨银溶液，100ml；

试剂(B)海波溶液，100ml；试剂(C)中性红染色液，100ml。

操作步骤^[1]

1、固定：10%中性福尔马林是的固定液，应当避免使用铬酸盐和氧化汞等固定液。

2、切片：所有类型的切片都可以处理，数值切片可能需要做一些调整。

3、将实验切片及对照切片入蒸馏水中。

4、入 Fontana 氨银溶液，避光浸染 12～24h 或 56℃温箱孵育 30～40min。

4、蒸馏水多次洗净(5～6 次)。

5、入海波溶液处理切片 1～5min。

6、自来水处理 3～5min。

7、(可选)入中性红染色液，轻轻复染 5min。

8、蒸馏水冲洗。

9、95%乙醇、无水乙醇脱水。

10、二甲苯透明、中性树胶封固。

注意事项^[1]

1、 注意镜下控制 Fontana 氨银溶液的染色时间，以黑色素颗粒呈现黑色为宜。如果染色时间过长，脂褐素、胆色素、橙色血质也会呈黑色，不易于黑色素区分。

2、与 Fontana 氨银溶液接触的器皿应严格清洗，否则可能与残余污染物发生化学反应。

3、长期暴露在 56℃下的切片，可能会产生细小的沉着物。

4、脆弱的物质可能要涂上一层火棉胶，避免切片从载玻片上翘起。

主要参考资料

[1] Masson-Fontana 黑色素染色液说明书