甲基绿-派络宁染色液的染色原理和操作事项

背景及概述^[1]

甲基绿、派洛宁为两种碱性染料。甲基绿分子有两个正电荷，易与双链DNA结合，使DNA显示绿色，派洛宁分子有一个正电荷，易与RNA结合，使RNA显示红色。甲基绿与吡罗红混合使用时，即称为甲基绿-派洛宁染色液(又名：甲基绿-吡罗红)。甲基绿-派洛宁染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在本甲基绿-派洛宁染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行甲基绿-派洛宁复染。

原理^[1]

甲基绿-派洛宁染色液染色的原理主要有两个方面：①染色与聚合程度有关，甲基绿与聚合程度高的DNA优先结合呈绿色，吡罗红优先与ＲNA结合呈红色；②甲基绿和吡罗红在水中电离后都带正电荷，但甲基绿碱性较吡罗红要强，甲基绿易与细胞核极性吸附而染色，吡罗红易与细胞质吸附结合。因此，pH过低甲基绿染色效果差；pH过高吡罗红染色效果不良。由染色原理可知，pH对染色结果有影响，考虑到不同材料细胞内pH可能存在差别，不同的材料对甲基绿-派洛宁染色液染色效果可能也存在差别。

注意事项^[1]

1、尽量减少反复冻融的次数，以免失效。

2、在使用Trypsin-EDTAsolution过程中，要特别注意避免消化液被细菌污染。

3、Trypsin-EDTAsolution消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

主要参考资料

[1] 影响吡罗红甲基绿染液染色效果的探究实验