特级胎牛血清的冻存

概述^[1]

胎牛血清是妊娠后期剖腹取出的胎牛血清。胎牛血清营养成分完全而丰富，代谢产物极少，微生物感染的可能性最小，品质最高，是组织细胞培养和病毒增殖时的重要营养来源。特级胎牛血清价格昂贵，是经过胚胎干细胞测试的专用级血清，级胎牛血清具有极低的BSE和病毒感染风险这类产品符合USP/EP标准，并通过相应的多达90项质量测试，包括EMA病毒测试、USP/EP支原体、内毒素、性能、生化/激素分析和Oritain指纹识别。大多数产品经过三级0.1μm过滤制造。特级胎牛血清主要用于培养胚胎干细胞，间充质干细胞等干细胞。

细胞冻存步骤

1、在特级胎牛血清冷冻管上标记好日期、研究者姓名、细胞数、细胞传代数和细胞类型（以及任何其他有用信息，比如遗传修饰）。

2、如果细胞贴壁，则去除细胞培养基，用PBS洗涤，加入足量胰蛋白酶覆盖细胞并在37°C培养箱中孵育约2分钟。在细胞培养基中重悬细胞并移入50mLFalcon管中。

3、如果细胞为悬浮状态，只需将所需体积细胞直接移入50mLFalcon管中。

4、用血细胞计数器进行细胞计数以确定其活力。用于冷冻保存的细胞活力至少应为75%。

5、在室温下以1，000rpm离心5分钟。

6、准备冷冻培养基。

7、去除上清液，轻轻散开沉淀物。

8、添加冷冻培养基至所需的细胞密度。对于哺乳动物细胞，所需细胞密度通常为10^6/mL冷冻培养基。在室温下，细胞不应在冷冻培养基中超过10分钟。

9、在各冷冻管中各分装1mL，并盖紧盖子。

10、室温下将冷冻管移至CoolCell快速冷冻机中，然后放入-80°C冰箱中。CoolCell快速冷冻机将确保温度以1°C/分钟稳步下降。

11、大约24小时后，从CoolCell快速冷冻机中取出冷冻管并转移到液氮中长期储存。

主要参考资料

[1] 农业大词典

[2] 特级胎牛血清使用说明