改良MASSON三色染色液的染色原理和染色步骤

背景及概述^[1-2]

结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagenfiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

目前，Masson三色染色法仍是胶原纤维染色的主要方法之一。它在临床外检和科研教学等方面有着重要的意义。在实际工作中，传统的Masson三色染色法操作程序多，染色效果欠佳，且不太稳定，改良MASSON三色染色液则可避免上述问题。改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。改良Masson三色染色与常规Masson三色染色的区别在于采用天青石蓝苏木素淡染细胞核。其特点在于：分化时间短(1～2分钟)；色彩清晰鲜艳；适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；所染切片保存时间长且不易褪色。改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，细胞核呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

原理^[1-2]

改良MASSON三色染色液原理是利用苏木素，酸性品红和苯胺蓝对结缔组织和神经嗜银颗粒、胶原纤维等组织染色，使时间缩短，步骤简便。改进后的方法，将传统的Masson三色染色法作了如下调整和改动：Bowin氏液由10%中性固定液[2]代替，省略了0.5%碘酒精作用10min，5%硫代硫酸钠作用5min和1%冰醋酸处理1min及地衣红染30～60min等过程，然后将原丽春红酸性品红，1%磷钼酸，2%苯胺蓝的染色时间分别由15min，5min，5min，缩短为加热3min，1min，1min.通过对以上各步的调整和改进，使染色时间由原来的近3h，缩短为30min左右，且颜色对比度好，层次清楚，胞核胞浆着均匀。值得注意的是：在经过1%磷钼酸分化后的几步禁止用水冲洗，直接用95%酒精洗，然后脱水，透明封片，这样可防止切片脱色，染出的组织切片效果更好。

染液的配制^[1-2]

Bouin液、Harris苏木素、0.5%盐酸酒精、Masson复合染色液、0.2%醋酸水溶液、5%磷钼酸、2%苯胺蓝溶液。

染色步骤^[1-2]

中性甲醛溶液固定组织，石蜡切片4~6μm，常规脱蜡至水，Bouin液固定10~15min，Harris苏木素染色4~5min，流水冲洗2min，0.5%盐酸酒精分化10~30s，流水冲洗5min，Masson复合染色液4~5min，0.2%醋酸水溶液稍冲洗，5%磷钼酸分化5~10min，0.2%醋酸水溶液稍冲洗，2%苯胺蓝溶液10~30s，无水乙醇冲洗干净，自然晾干，中性树胶封片。

主要参考资料

[1] 改良Masson三色染色法在胶原纤维中的应用

[2] 改良Masson三色染色法在应用中的体会