粪便RNA提取试剂盒

概述^[1]

粪便RNA提取试剂盒设计用于简便快速提取粪便、肠内容物、干粪、口腔棉拭子、分泌物等富含 PCR 抑制因子样本总 RNA。专利 IRT 技术（Inhibitor Removal Technology®）能完全去除这些样本中含有的 PCR抑制物，如未完全消化的植物成分、裂解红细胞的亚铁血红素等。试剂盒含 DNase I 及相应试剂，可去除可能污染的基因组 DNA。最终 RNA 洗脱浓缩在 RNade-Free Water 中，可直接用于 cDNA synthesis 或 RT-qPCR 等下游实验。

操作预览^[1]

建议粪便或生物固体加样 0.25g。粪便采样后尽快-80℃保存，以保护 RNA 完整性。

化学裂解缓冲液与 0.1mm 玻璃研磨珠，共同作用充分裂解微生物细胞。绑定液（PM3）把 RNA 吸附到离心柱滤膜上，DNase 消化残余的基因组 DNA 后，冲洗并洗脱到 RNase-free Water 中，最终 RNA 可直接用于 RT-qPCR等下游实验。

若实验要求 RNA 需要再一步 DNase 处理，建议使用 DNase Max™ Kit，一种全新的室温稳定保存的 DNase 完全去除基因组 DNA。只需 20min 即可消化掉 30μg DNA，无需加热或 EDTA 干涉，采用特制的树脂能轻易去除 DNase 酶。使用 DNase Max™ Kit 处理完以后，RNA 仍能保持原有的高质量。

样本储存与保护^[1]

从粪便微生物中提取的 RNA 的得率和完整性很大程度上受个体消化系统功能、特定饮食菜单以及收集样本到-80℃保存耗时长短影响。粪便主要成分是水（65-85%）、未完全消化食物、胆汁、胆红素（由死亡红细胞衍生）和死亡细菌（可达 50%）等。因为存在大量的死亡或濒死细菌及人体细胞，从粪便中提取的 RNA 用标准分析方法鉴定能看到一定成都的降解。QPCR 检测从粪便或肠内容物提取的 RNA 应注意设计检测小片段 RNA，以提高检测的灵敏度。

为了提供粪便 RNA 的质量，采集后尽快处理。可分装后-80℃冷冻，避免大块样本反复冻融。从冰箱中取出的样本，完全溶解前就可以加入含βME 的 PM2 裂解缓冲液到 Bead Tube 中。马上加样开始研磨以促使保护液能充分浸泡到细胞 RNA。新鲜采集未经冷冻的样品，也应该立即加入裂解缓冲液进行研磨，以获得质量的RNA。

主要参考资料

[1] 粪便 RNA 提取试剂盒产品说明书