多糖多酚植物RNA提取试剂盒

概述^[1]

本试剂盒可从植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织（如棉花叶片，成熟水稻叶片，拟南芥种子，白松松针，香蕉，枇杷叶片，马铃薯块茎，苹果，梨，西瓜果肉，猕猴桃，月季，烟草，沙棘，百合等）中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。提取的总RNA纯度高，没有基因组、蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。

产品特点

1.针对性强：专门针对多糖多酚等难提植物样本独特配置，流程更优化，结果有保障。

2.高效去除基因组：配有高效DNase I，可在柱上快速去除gDNA。

3.简便快捷：仅需1小时即可完成RNA提取实验。

4.安全低毒：无需酚和氯仿等毒性有机试剂。

试剂盒组成^[1]

保存条件：室温（15-25℃)保存。RNase-Free DNase I,缓冲液RDD和RNase-Free ddH₂O（管装)置于2-8℃保存；加入β-巯基乙醇的裂解液SL 4℃可放置一个月。

预防RNase污染，应注意以下几方面：

1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。

2．使用RNase-Free的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3．RNA在本制品中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用RNase-Free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

4．配制溶液应使用RNase-Free ddH₂O。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V，放置过夜，高压灭菌）。

注意事项^[1]

1．操作前在SL中加入β-巯基乙醇至终浓度5%，如475μl SL中加入25 μl β-巯基乙醇。此裂解液现用现配。配好的SL 4℃可放置一个月，裂解液SL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。

2．植物组织裂解是否充分直接影响到RNA提取的质量和产量，本试剂盒中提供的裂解液SL，适用于大多数植物组织的裂解，但有些植物组织（例如玉米的乳白色胚乳，红豆种子或小麦种子）或丝状真菌，由于次级代谢产物较特殊，异硫氰酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳的现象，购买试剂盒时请提醒我司业务人员更换另一种裂解液HL，将解决该问题。

3．次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

DNase I储存液的配制^[1]

将DNase I干粉（1500U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。

RNA纯度及浓度检测^[1]

完整性：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳（电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150V，15 min)检测完整性。由于细胞中70-80%的RNA为rRNA，电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。rRNA大小分别约为5 kb和2 kb，分别相当于28S和18S rRNA；植物叶片中由于含有大量的叶绿体RNA，可见4条或更多rRNA。植物RNA样品中rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0倍，否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。

纯度：OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数在1.8-2.1之间，比值为2.0是高质量RNA的标志。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mM Tris，pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。

浓度：取一定量的RNA提取物，用RNase-Free ddH2O稀释n倍，用RNase-Free ddH2O将分光光度计调零，取稀释液进行OD260,OD280测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：

终浓度（ng/μl）= （OD260)×（稀释倍数n)×40

主要参考资料

[1] 多酚多糖植物总RNA提取试剂盒产品说明书