EASYSPIN 细菌RNA快速提取试剂盒

概述^[1]

EASYSPIN 细菌RNA快速提取试剂盒采用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶， 然后用乙醇调节结合条件后， RNA在高盐状态下选择性吸附于离心柱内玻璃纤维素膜， 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤， 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase  free H₂0将纯净RNA从玻璃纤维素膜上洗脱。适用于快速提取细菌总RNA。

产品特点^[1]

•  离心吸附柱内玻璃纤维素膜全部采用进口特制吸附膜， 柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

•  不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

•  快速简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

•  多次过柱漂洗可确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值达1.9-2.0， 基本无DNA残留， 可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

产品储存^[1]

•  所有的溶液应该是澄清的， 如果环境温度低时溶液可能出现沉淀， 此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟， 即可恢复澄清。

•  不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀， 影响使用效果， 因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。

•  避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、 pH值变化， 各溶液使用后应及时旋紧盖子。

试剂盒组成、储存、稳定性^[1]

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

2. 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项^[1]

1.次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

2.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

3.需要自备乙醇。

4.裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5.预防RNase 污染，应注意以下几方面：

1)经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。

2)使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3)RNA 在裂解液RLT 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

4)配制溶液应使用无RNase 的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）

6.关于DNA 的微量残留：

一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,本公司的EASYspin系列RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留（一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：

选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup)，请联系我们索取具体操作说明书。 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I处理。请联系我们索取具体操作说明书。

7.RNA 纯度及浓度检测：

完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中rRNA 亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。

纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在2.1-2.2 之间（100%纯的RNA比值一般是2.2左右，很多公司无法达到这个标准，所以1.9-2.0就凑合用了，但是我们的产品标准一般可以达到2.1-2.2）。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9 之间，但这并不表示RNA 不纯。

浓度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

主要参考资料

[1]EASYSPIN 细菌RNA快速提取试剂盒产品说明书