酸性罗氏培养基基础的作用和应用研究

背景^[1-3]

酸性罗氏培养基用于结核杆菌的培养、计数、保存、照光试验、药物敏感性测定及菌型鉴定等。结核杆菌侵入人体后引起的结核病是一种具有强烈传染性的慢性消耗性疾病。它不受年龄、性别、种族、职业、地区的影响，人体许多器官、系统均可患结核病，其中以肺结核最为常见。90%以上的肺结核是通过呼吸道传染的。肺结核患者通过咳嗽、打喷嚏、高声谈笑，使带有结核杆菌的飞沫喷出体外。

酸性罗氏培养基配置步骤：

（一）准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。

（二）校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。

（三）过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。

（四）分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。

（五）灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。

应用^[4][5]

用于对罗氏培养基进一步改良的初步研究

以鸡蛋为基础的罗氏(Lowenstein Jensen,L-J)培养基作为培养结核分枝杆菌的一种固体培养基一直被广泛地应用于临床,它是目前培养结核分枝杆菌最为常用的培养基之一,也是最有代表性的一种,具有价廉、制作方法简便、便于观察菌落形态等特点。因为其成分内添加了抑制普通细菌生长的孔雀绿,所以罗氏培养基上罕有普通细菌(霉菌除外)生长的报道。在罗氏培养基成分中添加不同的抑菌物质观察该链球菌与结核菌的生长情况方法:收集临床分离的人型(M.TB)、牛型(M.b)结核分枝杆菌、链球菌(S)各一株,H37Rv结核标准菌株作为质控菌种,共4株分别接种于添加50.0(mg/ml)羧苄青霉素(Carbenicillin,以下简称为C)和/或硒酸钠5、10、20(μg/ml)罗氏培养基上,以未作接种的该罗氏培养基作为空白对照,37±0.2℃培养4周观察菌落生长情况。结果:新改良的罗氏培养基中加入的羧苄青霉素(C)和一定量的硒酸钠对该链球菌均有不同程度的抑制作用,而含20(μg/ml)硒酸钠、羧苄青霉素(C)+10(μg/ml)硒酸钠或羧苄青霉素(C)+20(μg/ml)硒酸钠均可完全抑制该链球菌的生长;除含20(μg/ml)硒酸钠和羧苄青霉素(C)+20(μg/ml)硒酸钠两种罗氏培养基对3株结核分枝杆菌有轻度抑制作用外,其余均对结核分枝杆菌生长无明显影响。

参考文献

[1]A selective oleic acid albumin agar medium for tubercule bacilli.Mitchison,D.A.,B.W Allen,L.Carrol,J.M.Dickinson,V.R.Aber.J.Med.Microbiol.1972

[2]Diagnostic Methods in Tuberculosis.Ⅱ.Demonstration of M.tuberculosis by Culture.Cummings,M.M.Am.J.Clin.Path.1951

[3][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958

[4][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958

[5]于滨.对罗氏培养基进一步改良的初步研究[D].大连医科大学,2008.