823Cells复苏与冻存方法

823Cells概述^[1]

823Cells是人胃腺癌细胞（低分化），形态特征呈上皮样，生长状态是贴壁生长，RPMI1640+10%FBS中培养，按照1:3传代，2-3天换液一次。在无血清细胞冻存液中保存。

823Cells处理方法^[1]

收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100×，200×各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。

823Cells复苏与冻存方法^[1]

复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。

主要参考文献

[1] Bo Leng，Xiao-Dan Liu，Qing-Xi Chen；Inhibitory effects of anticancer peptide from Mercenaria on the BGC-823 cells and several enzymes。《FEBS letters》 2005