无淀粉改良罗氏培养基的用途和应用研究

背景^[1-3]

无淀粉改良罗氏培养基是结核杆菌分离培养的分离鉴定培养基。无淀粉改良罗氏培养基全称罗-琴（L-J）培养基(Lowenstein-Jenden medium)主要组成分新鲜鸡蛋液、谷氨酸钠、甘油、孔雀石绿、磷酸二氢钾、硫酸镁、柠檬酸镁。

分枝杆菌等痰液细菌在人工培养时，必须有足够的营养成分。谷氨酸钠为细菌生长提供氮源；鸡卵液不仅是良好的营养物质，而且还能降低脂肪酸的毒性；甘油和枸橼酸盐可补充碳源；钾、镁、磷、硫等无机盐也是细菌生长不可缺乏的生长元素；磷酸盐有缓冲作用；因此，培养基能提供大多数分枝杆菌良好的生长环境。结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～4X0.4μm。分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸（mycolic acid）包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法，以5%石炭酸复红加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。本菌无芽孢、无鞭毛。结核分枝杆菌最适温度为37℃，低于30℃不生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。在一般培养基中每分裂1代需时18～24小时，营养丰富时只需5小时。

应用^[4][5]

用于对罗氏培养基进一步改良的初步研究

鸡蛋为基础的罗氏(Lowenstein Jensen,L-J)培养基作为培养结核分枝杆菌的一种固体培养基一直被广泛地应用于临床,它是目前培养结核分枝杆菌最为常用的培养基之一,也是最有代表性的一种,具有价廉、制作方法简便、便于观察菌落形态等特点。因为其成分内添加了抑制普通细菌生长的孔雀绿,所以罗氏培养基上罕有普通细菌(霉菌除外)生长的报道。在罗氏培养基成分中添加不同的抑菌物质观察该链球菌与结核菌的生长情况方法:收集临床分离的人型(M.TB)、牛型(M.b)结核分枝杆菌、链球菌(S)各一株,H37Rv结核标准菌株作为质控菌种,共4株分别接种于添加50.0(mg/ml)羧苄青霉素(Carbenicillin,以下简称为C)和/或硒酸钠5、10、20(μg/ml)罗氏培养基上,以未作接种的该罗氏培养基作为空白对照,37±0.2℃培养4周观察菌落生长情况。结果:新改良的罗氏培养基中加入的羧苄青霉素(C)和一定量的硒酸钠对该链球菌均有不同程度的抑制作用,而含20(μg/ml)硒酸钠、羧苄青霉素(C)+10(μg/ml)硒酸钠或羧苄青霉素(C)+20(μg/ml)硒酸钠均可完全抑制该链球菌的生长;除含20(μg/ml)硒酸钠和羧苄青霉素(C)+20(μg/ml)硒酸钠两种罗氏培养基对3株结核分枝杆菌有轻度抑制作用外,其余均对结核分枝杆菌生长无明显影响。

参考文献

[1]A selective oleic acid albumin agar medium for tubercule bacilli.Mitchison,D.A.,B.W Allen,L.Carrol,J.M.Dickinson,V.R.Aber.J.Med.Microbiol.1972

[2]Diagnostic Methods in Tuberculosis.Ⅱ.Demonstration of M.tuberculosis by Culture.Cummings,M.M.Am.J.Clin.Path.1951

[3][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958

[4][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958

[5]于滨.对罗氏培养基进一步改良的初步研究[D].大连医科大学,2008.