替可克肽使用说明书
发布日期:2020/2/18 14:50:57
背景及概述[1][2]
替可克肽(Tetracosactide)为人工合成的24肽促皮质素类似物，氨基酸的排列顺序和天然促皮质素(人、牛、猪)氨基端24个氨基酸相同，与天然ACTH具有相同的生理活性。最突出的特点是一般情况下不会产生抗体反应，无严重副作用，特别适用于对于天然猪促皮质素有过敏反应或无效的患者。能诱导肾上腺增生，刺激肾上腺皮质激素，尤其是氢化可的松（皮质醇）和某些盐皮质激素如皮质酮的分泌，也能刺激雄激素的分泌，但作用较弱。对醛固酮的分泌几无影响。半衰期为3小时。2008年FDA批准诺华的替可克肽用于肾上腺皮质功能减退症的诊断。目前RandboudUniversity正在研究其对特发膜性肾病的治疗作用。目前替可克肽的合成主要采用全液相合成方法进行。该方法步骤繁多，合成起来花费时间较长，并且需要用到昂贵的催化剂和高压设备，因此成本高、杂质多和操作危险、收率低等缺点。有报道采用Z保护策略逐个合成，每步均采用氢化脱除保护基，步骤长，操作繁琐以及成本高，收率低。逐个偶联而导致的丝氨酸易消旋问题，在纯化过程中难以纯化。
药理作用[3]
替可克肽作用与促肾上腺皮质激素相同，可刺激肾上腺皮质分泌皮质激素（主要是皮质醇），因此对肾上腺皮质功能严重低下者无效。
药代动力学[3]
替可克肽为人工合成的24个氨基酸组成的多肽。其结构和促肾上腺皮质激素的第1个～第24个氨基酸相同。静脉给药可迅速升高血皮质醇水平，需维持血皮质醇浓度时应持续静脉点滴给药。肌内注射，血皮质醇于注射后1h达到高峰。以后可使升高的皮质醇维持约24h。
适应证[3]
替可克肽与促肾上腺皮质激素的作用相同。因此，其临床应用范围与促肾上腺皮激素相似。由于相同的用药指征多选用作用更强、副作用较小的皮质激素。因此，替可克肽目前仅用于部分克罗恩病或溃疡性结肠炎和风湿性关节炎等少数疾病。长期应用皮质激素治疗的患者可联合使用替可克肽，以预防肾上腺萎缩。替可克肽和促肾上腺皮质激素一样也用于肾上腺皮质功能检查。但长效替可克肽一般不作为标准的肾上腺皮质功能试验用药。
禁忌证[3]
不宜用于结核病、高血压、糖尿病、溃疡病和孕妇。
不良反应[3]
与促肾上腺皮质激素相同。大量使用可引起水钠潴留和高血压、精神异常、糖耐量异常、蛋白质消耗、骨质疏松、低血钾、月经异常、色素沉着和痤疮等。少数患者可对替可克肽出现过敏反应，但发生率较促肾上腺皮质激素少。
用法用量[3]
2岁以内每2～8天250μg；5～12岁每2～8天为250μg～1mg。剂量应根据不同疾病以及个体的反应而定。
制备[1]
替可克肽制备如下：
步骤1：序列如SEQIDNo.1所示的多肽-固相载体
H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Val-Lys(Boc)-Val-Tyr(tBu)-Pro-2-CTC肽树脂的合成
称取替代度为0.4mmol/g的2-CTC树脂50g（20mmol），加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取13.5gFmoc-Pro-OH（40mmol）用20mlDMF溶解，冰水浴下加入14.1mlDIPEA（80mmol）活化3分钟后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入15ml无水甲醇封闭0.5小时。用DMF洗涤3次，DCM洗3次，甲醇收缩抽干，得到Fmoc-Pro-2-CTC树脂52.4g，检测替代度为0.21mmol/g称取替代度为0.21mmol/g的Fmoc-Pro-CTC树脂50g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脱保护5和10分钟，反应结束后，用DMF洗涤树脂6次，采用茚三酮检测树脂有颜色。称取Fmoc-Tyr(tBu)-OH9.2g和2.97gHOBt，用50mlDMF溶解，冰水浴下加入DIPCDI3.42ml活化5分钟，加入到反应柱中，室温反应2小时，反应终点采用茚三酮检测来判断（如果树脂无色透明，则反应完全；如果树脂显色则继续反映1小时。下同），反应结束后，用DMF洗涤树脂3次。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脱保护5和10分钟，反应结束后，用DMF洗涤树脂6次，采用茚三酮检测树脂有颜色。采用相同的方法偶联Fmoc-Val-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH。当Fmoc-Lys(Boc)-OH偶联结束后用DMF洗涤树脂3次。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脱保护5和10分钟，反应结束后，用DMF洗涤树脂6次，采用茚三酮检测树脂有颜色。得到序列如SEQIDNo.1所示的多肽-固相载体：
H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Val-Lys(Boc)-Val-Tyr(tBu)-Pro-2-CTC肽树脂，待用。
步骤2：序列如SEQIDNo.2所示的第二多肽
Boc-Ser(Trt)-Tyr(tBu)-Ser(Psi(Me，Me)pro)-Met-Glu(OtBu)-His(Trt)-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Gly-OH的制备
称取替代度为0.5mmol/g的2-CTC树脂40g（20mmol），加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取5.94gFmoc-Gly-OH（40mmol）用70mlDMF溶解，冰水浴下加入14.1mlDIPEA（80mmol）活化3分钟后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入15ml无水甲醇封闭0.5小时。用DMF洗涤3次，DCM洗3次。
加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脱保护5和10分钟，反应结束后，用DMF洗涤树脂6次，采用茚三酮检测树脂有颜色。称取Fmoc-Trp(Boc)-OH21.1g和5.94gHOBt，用90mlDMF溶解，冰水浴下加入DIPCDI6.85ml活化5分钟，加入到反应柱中，室温反应2小时，反应终点采用茚三酮检测来判断（如果树脂无色透明，则反应完全；如果树脂显色则继续反映1小时。下同），反应结束后，用DMF洗涤树脂3次。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脱保护5和10分钟，反应结束后，用DMF洗涤树脂6次，采用茚三酮检测树脂有颜色。采用相同的方法偶联Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Met-OH。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脱保护5和10分钟，反应结束后，用DMF洗涤树脂6次，采用茚三酮检测树脂有颜色。称取Fmoc-Tyr(tBu)-Ser(Psi(Me，Me)pro)-OH39.5g和8.9gHOBt，用100mlDMF溶解，冰水浴下加入DIPCDI10.27ml活化5分钟，加入到反应柱中，室温反应2小时，反应终点采用茚三酮检测来判断（如果树脂无色透明，则反应完全；如果树脂显色则继续反映1小时。下同），反应结束后，用DMF洗涤树脂3次。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脱保护5和10分钟，反应结束后，用DMF洗涤树脂6次，采用茚三酮检测树脂有颜色。采用相同的方法偶联Boc-Ser(Trt)-OH，反应结束，DMF洗3次，DCM洗3次，甲醇收缩，抽干，得到第二多肽-第二固相载体：
Boc-Ser(Trt)-Tyr(tBu)-Ser(Psi(Me，Me)pro)-Met-glu(OtBu)-His(Trt)-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Gly-2-CTC肽树脂79.4g。
将得到的第二多肽-第二固相载体79.4g，加入预先配置好的裂解液TFE：DCM=1：4（V：V）800ml，室温裂解2.5小时，过滤，30mlDCM洗涤，合并滤液，减压浓缩至80ml，滴加到800ml无水乙醚析出白色固体，离心抽干得到白色固体38.1g，收率80.1%。HPLC纯度为89.2%。
步骤3：替可克肽肽树脂的制备：
称取步骤2得到的11.2g第二多肽精肽，HOAt0.61g，用50mlDCM溶解，冰水浴下加入0.68mlDIPCDI活化4分钟，加入到步骤2得到的多肽-固相载体：
H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Val-Lys(Boc)-Val-Tyr(tBu)-Pro-2-CTC肽树脂（2mmol）中，室温反应3小时，反应终点采用茚三酮检测来判断（如果树脂无色透明，则反应完全；如果树脂显色则继续反映1小时。下同），反应结束后，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤3次，甲醇收缩，抽干，得到替可克肽肽树脂12.4g，树脂增重率85.1%。
主要参考资料
[1] CN201310100839.8替可克肽的制备方法
[2] CN201610927175.6一种醋酸替可克肽的纯化方法
[3] 替可克肽说明书
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