细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒的原理

细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒概述^[1][2]

在哺乳动物细胞凋亡执行阶段起重作用的一系列半胱氨酸蛋白酶基因为细胞凋亡蛋白酶-3（Caspase-3），Caspase-3被认为是各种凋亡刺激因子激活的Caspase家族中的关键蛋白酶，活性Caspase可作用于一些其他Caspase成员，并降解凋亡细胞中的某些蛋白质。Caspase-3抑制物是细胞凋亡抑制剂，有希望成为治疗因细胞过度死亡所致相关疾病的重要分子。

细胞凋亡蛋白酶-3（Caspase-3）的激活在凋亡信号传导的许多途径中发挥着关键的作用。Caspase-3正常以酶原（32KDa）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KDa）和两个小亚基（12KDa）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。活化的Caspase-3可以剪切特定的氨基酸序列。针对这种特性，开发了具有高度特异性Caspase-3荧光底物用来检测Caspase-3 活性，即细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒。

细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒原理^[1][2]

细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒提供一种简单方便的方法检测依赖DEVD的 caspase活性。本检测技术基于对底物DEVD-AFC（AFC：7-氨基-4-三氟甲基香豆素）。DEVD-AFC发生蓝光（λmax = 400 nm）；CPP32或者相关caspases酶切底物后，游离的AFC发出黄绿荧光（lmax = 505 nm），这种荧光可以被荧光计或者荧光微量滴定板读数器定量分析。比较凋亡样品中和阴性对照中AFC发出的荧光就可以检测caspase-3活性增加的倍数。

主要参考文献

[1] Ponder KG & Boise LH The prodomain of caspase-3 regulates its own removal and caspase activation. Cell Death Discov 5:56 (2019).

[2] Jung TW  et al. Phosphatidylcholine causes adipocyte-specific lipolysis and apoptosis in adipose and muscle tissues. PLoS One 14:e0214760 (2019).