制备醋酸兰瑞肽的方法

概述

兰瑞肽中文化学名称：3-(2-萘基)-D-丙氨酰基-L-半胱氨酰基-L-酪氨酰基-D-色氨酰基-L-赖氨酰基-L-缬氨酰基-L-半胱氨酰基-L-苏氨酰胺，环(2～7)二硫化物；英文化学名称：3-(2-naphthalenyl)-Dalanyl-L-cysteinyl-L-tyrosyl-D-tryptophyl-L-lysyl-Lvalyl-L-cysteinyl-L-threoninamide，cyclic(2～7)disulfide。分子式为C54H69N11O10S2；相对分子质量为1096.34；CAS登记号为108736-35-2。兰瑞肽是目前研制成功的个生长抑素类缓释制剂，是一种新型的长效生长抑素(SM)八肽类似物，它是许多内分泌、神经内分泌、外分泌和旁分泌机能的肽抑制剂。

制备[1]

醋酸兰瑞肽，路线如下：

具体工艺如下：

1）Fmoc保护多肽树脂的制备：氨基树脂溶胀：取30.0克取代度为0.60mmol/g的Sieber树脂，加入240mL溶剂DMF，将树脂溶胀30min，抽干溶剂，再用DMF洗涤两次。

2）Fmoc保护基的脱除：向溶胀后的树脂中加入240mL体积比为20％的哌啶/DMF溶液，在20～25℃的条件下，反应30min。抽干溶剂，并用DMF洗涤六次。

3）氨基酸的活化：取54mmolFmoc保护的氨基酸(Fmoc-Thr(OtBu)-OH)和54mmolOxymapure用DMF(240mL)溶解，降温至0～5度，54mmolDIC滴加至反映液中，活化5～10min。

4）氨基酸的缩合反应：将活化后的氨基酸加至脱除Fmoc保护基的氨基树脂中，控温25～30度的条件下进行氨基酸缩合反应2-3h，荫三酮监控反应终点。

5）荫三酮检测法：取少量树脂置于试管中，用DMF洗涤3～4次，滤干溶剂。试管中加入85％的苯酚乙醇、吡啶、5％的荫三酮乙醇溶液各三滴，然后加热110度反应3min，观察树脂颜色直至无色。依次循环操作链接氨基酸，分别通过上述Fmoc保护基的脱除、氨基酸活化、缩合反应将其与七个氨基酸Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH及Fmoc-D-2-Nal-OH依次缩合连接至树脂上，完成合成Fmoc保护多肽树脂：

NH2-D-Nal-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Val-Cys(Trt)-Thr(OtBu)-Sieber

最终得到Fmoc保护多肽树脂63.71g，树脂增重收率98.80％。

6）线性肽链的制备：将Fmoc保护多肽树脂在0～5度下加入至637mL的1vol％的TFA/DCM溶液中，控温20～25度反应3小时，HPLC监控反应过程。反应结束后，过滤，滤饼用DCM淋洗。滤液浓缩后用纯化水打浆，再次过滤，滤饼干燥后得到全保护的线性肽链。

7）合环反应：将碘(3.8g，15mmoL；1.5eq)溶解在DCM中，得到氧化体系。将全保护的线性肽链(18.95g，10mmoL；1eq)溶解在DCM(95mL)中，形成浓度为200mg/ml的线性肽链溶解液，且氧化体系和线性肽链溶解液之间的体积比为5：1。采用反滴法，将线性肽链溶解液以3～5ml/min的速度缓慢滴加入氧化体系中，控温15～25度，反应3小时，HPLC监控反应进程。反应结束后，加入抗坏血酸的水溶液淬灭，分液。有机相干燥，浓缩得到合环产物，即全保护的兰瑞肽。其中，合环产物全保护的兰瑞肽的纯度为94％，自反应副产物二聚体的含量为0.50％。

8）侧链Fmoc保护基的脱除：用TFA/H2O＝95/5的切割液(10Vol)，控温0～5度下向切割液中加入合环产物，然后恢复至20～25度反应2～3小时，HPLC监控反应进程。反应结束后，反应液浓缩至5Vol，然后将其慢慢滴加至0～5度的MTBE(50Vol)中，搅拌析晶2小时，过滤，滤饼干燥得到兰瑞肽的粗肽。粗肽纯度94％，总收率81％。

9）粗肽提纯、转盐：采用反向液相色谱法，以C4-HG填料对所述粗产物进行纯化，其中流动相A相采用0.05vol％TFA水溶液，流动相B相采用乙腈。转盐使用3.2wt％醋酸铵的水溶液和乙腈作为流动相冲洗，然后用0.3％的AcOH水溶液和乙腈梯度洗脱后冻干，得到最终产品醋酸兰瑞肽。醋酸兰瑞肽的总收率为74.5％。

主要参考资料

[1] 醋酸兰瑞肽(lanreotideacetate)

[2] CN201910735754.4醋酸兰瑞肽的合成方法