标准大鼠血清(碳吸附过滤)的应用

背景^[1-3]

标准大鼠血清(碳吸附过滤)是将标准大鼠血液制得血清经碳吸附过滤获得的低水平类固醇类的血清产品。血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。

血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。碳吸附型标准大鼠血清是一款低水平类固醇类的血清产品，通过碳吸附可降低血清中许多激素及生长因子的浓度，如雌二醇、皮质醇、皮质酮、B类维生素、T3、T4、前列腺素等，该血清适用于上述一些分子可能干扰实验结果的实验中对于那些需要这些分子的细胞培养，可能降低细胞生长性能。 血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。活性炭能够结合脂溶性分子，因此能够用来除去激素类物质。

应用^[4][5]

用于大鼠骨髓间充质干细胞培养方法的比较及细胞鉴定

研究大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)的不同培养方法的差异，及对培养出的不同代数的细胞做形态学观察及表面标记物鉴定。为今后向实验提供高纯度的BMSCs提供方法及依据。

方法：取150g~180g左右2只雄性SD大鼠后肢股骨、胫骨骨髓，分别行全骨髓培养法和密度密度梯度离心法培养。将2种方法分离出的细胞进行贴壁细胞的筛选并培养，利用BMSCs的易于贴附于塑料制品的特性给予多次传代纯化。观察两种方法培养的不同代数的细胞形态，绘制贴壁的细胞生长曲线，流式细胞仪检测P5代cd34、cd29、cd44、cd45细胞因子，鉴定是否为骨髓间充质干细胞。

结果：形态学学观察上可见2种方法所获取的细胞呈长梭形，呈现特征性的漩涡状生长。绘制2种方法P0至P10代的细胞增殖生长曲线图，以每一代单皿传代数量为检测指标进行单样本配对T检验分析结果为：P＜0.05。证明全骨髓培养法细胞增殖比较快。对P3代2组细胞进行流式细胞检测结果CD34、CD45阴性，CD29、CD44阳性。证明2种方法培养的细胞符合BMSCs的特性。

结论：全骨髓培养方法相比于密度密度梯度离心法不仅可以成功分离骨髓间充质干细胞而且对试剂要求少，更加经济，操作更简单、易行，培养所需周期较短。全骨髓培养法培养出的BMSCs并在5~10代时的细胞纯度高，活性好且BMSCs纯度较稳定，可进行BMSCs多向分化诱导及应用BMSCs进行动物实验研究及临床应用。

参考文献

[1]Mesenchymal stem cells showed the highest potential for the regeneration of injured liver tissue compared with other subpopulations of the bone marrow[J].Kyung-Ah Cho,Sun-Young Ju,Su Jin Cho,Yun-Jae Jung,So-Youn Woo,Ju-Young Seoh,Ho-Seong Han,Kyung-Ha Ryu.Cell Biology International.2009(7)

[2]Donor-derived hairy cell leukemia[J].Guillermo J.Ruiz-Argü,elles,Guillermo J.Ruiz-Delgado,Edgar Calderó,n-Meza,Alejandro Ruiz-Argü,elles,Javier Garcé,s-Eisele.Leukemia&Lymphoma.2009(10)

[3]VEGFR1/CXCR4-positive progenitor cells modulate local inflammation and augment tissue perfusion by a SDF-1-dependent mechanism[J].Andrew Wragg,Jason A.Mellad,Leilani E.Beltran,Mikhail Konoplyannikov,Hong San,Sherry Boozer,Robert J.Deans,Anthony Mathur,Robert J.Lederman,Jason C.Kovacic,Manfred Boehm.Journal of Molecular Medicine.2008(11)

[4]Chondrogenesis,bone morphogenetic protein-4 and mesenchymal stem cells[J].N.D.Miljkovic,G.M.Cooper,K.G.Marra.Osteoarthritis and Cartilage.2008(10)

[5]杨陆蒙.大鼠骨髓间充质干细胞培养方法的比较及细胞鉴定[D].新疆医科大学,2012.